农药残留——氯恶草唑检测方法

1．分析目标化合物

氯恶草唑、高氯恶草唑、恶唑禾草灵、高恶唑禾草灵、CDHB〔6-氯－2,3－二氢苯并噁唑－2－酮〕

2、仪器设备

带紫外分光光度检测器的高效液相色谱仪（HPLC(UV)）。

液相色谱--质谱仪（LC/MS）

3、试剂

乙腈

氯化钠

乙酸乙酯

正己烷

盐酸

氯恶草唑标准品：含氯恶草唑98％以上，熔点为85℃～87℃。

4．试验溶液的制备

1） 提取方法

① 谷类，豆类和种子类：

称取10.0g，加入20mL水，放置2小时。

加入100mL乙腈，均质后，抽滤。滤纸上的残留物中加入50mL乙腈均质后，按上述同样操作，合并所得的滤液，40℃以下浓缩至约30mL。加入20g氯化钠和100mL 0.5 mol/L盐酸，分别用100mL和50mL乙酸乙酯：正己烷（3：7）混合溶液振荡提取两次。提取液中加入无水硫酸钠脱水，滤去无水硫酸钠后，滤出液在40℃以下浓缩，除去溶剂。

残留物中加入30mL正己烷，每次用30mL正己烷饱和乙腈溶液振荡提取两次。提取液在40℃以下浓缩，除去溶剂。

②水果和蔬菜

20.0g样品中加入100mL乙腈，均质后，抽滤。滤纸上的残留物中加入50mL乙腈均质，按上述同样操作，合并所得的滤液，40℃以下浓缩至约30ml。加入20g氯化钠和100mL 0.5 mol/L盐酸，分别用100mL和50mL乙酸乙酯：正己烷（3 ：7）混合溶液振荡提取两次。提取液在40℃以下浓缩，除去溶剂。

2）水解

在1）所得的残留物中加入10 mL 0.5mol/L盐酸，塞紧，不时振荡混合，在50℃下加温30分钟。加入100mL 10％氯化钠溶液，分别用100mL和50mL乙酸乙酯：正己烷（3 ：7）混合溶液振荡提取两次。提取液中加入无水硫酸钠脱水，滤去无水硫酸钠，滤液在40℃以下浓缩，除去溶剂。

3）净化方法

在2）水解所得的残留物中加入5mL正已烷溶解。

在丙三醇丙醇甲硅烷基化硅胶小柱(360mg) （I）下面连接三甲胺基丙基甲硅烷基化硅胶与苯砜酸甲硅烷基化硅胶混合小柱(600mg)（II）连接，注入10mL正已烷，舍弃流出液。柱中注入上述溶液，舍弃流出液。接着，依次注入10mL正已烷和30mL丙酮：正己烷（1：19）混合溶液，弃去各流出液，取下小柱（I），在小柱（II）中注入30 mL丙酮：正己烷（1：1）混合溶液，溶出液40℃以下浓缩，除去溶剂。残留物溶解在乙腈中，准确至1 mL，作为试验溶液。但是，分析样品为大豆、毛豆、豇豆时，用5mL正已烷代替乙腈溶解，用下述方法进一步净化：在色谱管(内径15 mm) 中注入5g悬浮在正已烷中的柱色谱用合成硅酸镁，其上面再装入约5g无水硫酸钠，放出正己烷至柱上端留有少量的正己烷。柱中注入上述所得的溶液，舍弃流出液，依次注入10mL正已烷和150mL丙酮：正己烷(1：19)混合溶液，舍弃各流出液。再注入150mL丙酮：正己烷(3：7)混合溶液，溶出液在40℃以下浓缩，除去溶剂。残留物溶解在乙腈中，准确至1mL，作为试验溶液。

5．标准曲线的制作

将氯恶草唑标准品配制成100 mg/L的丙酮溶液，取其1mL，在室温下通氮气除去溶剂。残留物与4．中2）同样操作，其残留物中加入乙腈溶解，至50mL。用乙腈稀释此溶液，配制成0.1～2 mg/L氯恶草唑的丙酮溶液数点，分别注入20μL于 HPLC中，用峰高法或面积法绘制成标准曲线。

6．定量試验

注入20μL试验溶液于HPLC中 ，根据5的标准曲线求出氯恶草唑的含量。

7．测定条件

1）HPLC

检测器：UV (波长235 nm)

柱：十八烷基甲硅烷基化硅胶（粒径5μm），内径4.6mm、长250mm。

柱温：40℃

流动相：乙腈：0.01 %三氯乙酸混合溶液，从(3：7)到(1：0)浓度梯度运行30分钟。

保留时间标准：10分钟

2）LC/MS

柱：十八烷基甲硅烷基化硅胶 （粒径3μm），内径 2mm、长 150mm。

柱温：40℃

流动相：含有0.2 %乙酸的乙睛：0.2％乙酸混合溶液，从(3：97)到(97：3)浓度梯度运行10分钟。

离子化方式：ESI(‐)

主离子： m/z 168、170

保持时间标准：10 分

8．定量限

0.05 mg/kg

9．注意事项

1）分析値

将氯恶草唑和恶唑禾草灵转变成CDHB后，对CDHB 进行定量，其含量乘以系数换算成氯恶草唑的含量，作为氯恶草唑的分析值。氯恶草唑的分析值中，包括氯恶草唑、高氯恶草唑、恶唑禾草灵、高恶唑禾草灵和CDHB。

2）检测方法概述

本方法乙腈从样品中提取氯恶草唑、高氯恶草唑和它们的代谢物恶唑禾草灵、高恶唑禾草灵和CDHB，转溶到乙酸乙酯：正己烷的混合溶液中。水果、蔬菜保持原样，谷类等用乙腈/正己烷分配脱脂后，用盐酸水解，氯恶草唑和恶唑禾草灵转变成CDHB。经丙三醇丙醇甲硅烷基化硅胶小柱、三甲胺基丙基甲硅烷基化硅胶与苯砜酸甲硅烷基化硅胶混合小柱和合成硅酸镁柱净化后，HPLC(UV)测定CDHB，LC/MS 确证。

3）注意点

① 用7所列的HPLC 测定条件，可以同时检测氯恶草唑和恶唑禾草灵。CDHB的保留时间约10分钟，恶唑禾草灵的保留时间约17分钟，氯恶草唑约24分钟。

② 按照4中2)所列示的操作，从氯恶草唑转变CDHB的转变率为95%。取得CDHB标准品时，绘制成CDHB的标准曲线，对CDHB定量，按下式求得氯恶草唑的含量。

氯恶草唑(包括恶唑禾草灵和CDHB)的含量= CDHB的含量×2.13

③ 按照这里所示的定量限値，对低于基准值的农产品，可用再浓缩试验溶液或增加样品量等方法应对。

④ 对于高氯恶草唑，用本检测方法能测定其水解生成的CDHB。

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