地克珠利和双硝苯脲二甲嘧啶醇检测方法

 

1．分析目标化合物

    农药等成分物质                                  分析目标化合物
     地克珠利                                            地克珠利        
     双硝苯脲二甲嘧啶醇                             N，N－二－(4－硝基苯基)尿素   

2．仪器设备

    带紫外分光光度检测器的高效液相色谱仪

3．试剂

    使用附录2所列试剂。

4．标准品

    地克珠利：含地克珠利99％以上，分解点为295℃。
    双硝苯脲二甲嘧啶醇：含N，N－二－(4－硝基苯基)尿素70～72％，分解点为265℃～275℃。

5．试验溶液的制备

a 提取方法
    肌肉：尽可能除去脂肪层，搅碎混合均匀后，称取其5.0g。
    脂肪：尽可能除去肌肉层，搅碎混合均匀后，称取其5.0g。
    肝脏和肾脏：搅碎混合均匀后，称取其5.0g。
    加入30mL乙腈，20mL乙腈饱和正己烷和10g无水硫酸钠，搅拌后，以每分钟3000转离心分离5分钟，乙腈层移入磨口减压浓缩器中。离心管内正己烷层和残留物中加入20mL乙腈，用振荡器激烈振荡1分钟后，按上述同样条件离心分离，合并乙腈层于磨口减压浓缩器中。加入10mL正丙醇, 40℃以下除去乙腈和正丙醇。残留物中加入3mL甲醇溶解，加入7mL 0.05mol/L磷酸二氢钠溶解。

b 净化方法
    在十八烷基甲硅烷基化硅胶小柱(500mg)中顺次注入10mL甲醇和10mL 0.05mol/L磷酸二氢钠溶液，弃去流出液。柱中注入a提取方法所得的溶液后，注入10mL甲醇：0.05mol/L磷酸二氢钠(3：7)的混合溶液，弃去流出液。注入10mL水：甲醇(1：4)混合溶液，收集流出液于磨口减压浓缩器中，40℃以下除去甲醇。残留中物加入1.0mL甲醇溶解，此为试验溶液。

6．操作方法

a 定性试验
    按下列操作条件进行试验，试验结果必须与标准品的一致。
    操作条件
    柱填充剂：十八烷基甲硅烷基化硅胶(粒度5μm)。
    柱：内径4.0～6.0mm，长150mm不锈钢管。 
    柱温： 40℃
    检测器：地克珠利试验，吸收波长为275nm；双硝苯脲二甲嘧啶醇试验，吸收波长为350nm。
    流动相：乙腈：0.025mol/l磷酸二氢钠(1：1)混合溶液。地克珠利试验时，调整流速使地克珠利约8分钟流出。双硝苯脲二甲嘧啶醇试验时，调整流速使N，N－二－(4－硝基苯基)尿素约6分钟流出。

b 定量试验
    根据与a 定性试验相同操作条件所得的试验结果，峰高法或峰面积法定量。

7．定量限

    地克珠利：0.1 mg/kg
    双硝苯脲二甲嘧啶醇：0.02 mg/kg [以N，N－二－(4－硝基苯基)尿素计]

8．注意事项

(1) 试验溶液的制备
    净化方法所用的十八烷基甲硅烷基化硅胶小柱预先使用地克珠利和双硝苯脲二甲嘧啶醇的标准品进行确认其保持和溶出性能。
(2) 标准溶液的配制
    ① 将相当于10.0mg地克珠利的标准品，溶解在10mLN，N－二甲基甲酰胺后，加入甲醇至100mL，作为地克珠利的标准原液（地克珠利100mg／L）。本标准原液保存在0～4℃，3个月内稳定。 
    ② 将相当于10.0mg N，N－二－（4－硝基苯基）尿素的双硝苯脲二甲嘧啶醇的标准品，溶解在10mLN，N－二甲基甲酰胺后，加入乙腈至200mL，作为双硝苯脲二甲嘧啶醇的标准原液（N，N－二－（4－硝基苯基）尿素50mg／L）。本标准原液保存在0～4℃，1个月内稳定。
    ③用甲醇将地克珠利和双硝苯脲二甲嘧啶醇各标准原液递减稀释，作为制作标准曲线用标准溶液。
(3)其它
    使用本检测方法检出地克珠利和双硝苯脲二甲嘧啶醇时，最好用带紫外可见多波长检测器和质量检测器的高效液相色谱仪确证。