来自人传代细胞系的细小病毒 关于传代细胞系可能有本属病毒污染的问题，是Hallauer等在研究黄热病病毒细胞培养时首先发现的，由于它关系到细胞系能否长期稳定传代和使用的一系列问题，以致引起了有关学者的重视。尤其在病毒学试验中，经常使用传代细胞系，因此，有必要对这一问题作简要介绍。 Hallauer等从1960年到1971年的11年间，对从欧洲某些实验室搜集来的43株人传代细胞系，进行了病毒分离试验。由于细胞系的带毒往往是潜伏状态的，细胞培养物并不经常产生细胞病变或者仅出现难以辨认的轻微退行性变化，给病毒的识别和分离带来困难。因此，除部分病毒是通过细胞病变识别的以外，大多数是以检出血凝素为先导，确定有红细胞凝集性因子存在，然后再进行病毒的分离和鉴定。由于病毒主要与细胞结合存在，为了把病毒从细胞中提取出来，Hallauer等应用碱性等渗缓冲液(02M甘氨酸缓冲液，pH90)对细胞单层进行浸泡以提取病毒：首先倒出被检细胞瓶中的维持液，以Hanks液清洗一次，然后加入上述碱性缓冲液覆盖细胞单层，室温浸泡30分钟，倒出上清液，即为含病毒的细胞浸出液。应用PBS对浸出液作倍倍稀释，然后加入08%豚鼠或人O型红细胞悬液，混匀，室温静置1～2小时判定。凝集价可高达千倍到万倍。另外，由于病毒在碱性环境中容易从细胞中释放，所以简便的办法是在换液时提高使用维持液的pH(76～78)，培养数天后，即可直接取维持液作血凝素检查，但它不如细胞浸出液的血凝效价高。通过这种方法，Harllauer等成功地检出了细胞系中污染的细小病毒，而且检出率之高，达到了惊人的程度(见表37-3)。
上述学者从43株细胞中分出病毒38株，通过血清学检查，分别属于3个血清型。其中以KBSH为最多，它与猪细小病毒(PPV)有共同抗原关系，一般认为两者为同一种病毒，并推测这种病毒很可能来源于组织培养中的生物制剂(如用猪胰脏制取的胰蛋白酶)。Croghan等就曾从这种蛋白酶中分离出过KBSH。其它两个型(TVX、LuⅢ)，与本属其它病毒没有共同抗原关系，在自然界也找不到宿主，来源尚不清楚。 这3种病毒无论在形态、结构、理化学和生物学特性等方面，都与本属病毒一致，无明显的独特性质。它们都具有较宽广的细胞感染范围，几乎能在各种人传代细胞系增殖(同样要求处于有丝分裂过程中的细胞)。对多种类型的红细胞有凝集作用，而且对温度无严格要求(4～37℃均可)。人工感染实验动物时，只LuⅢ对新生仓鼠有致病性。 据上述学者的经验，多数传代细胞系的带毒呈潜伏状态，可连续数月到数年不被觉察。但在细胞培养条件骤变、运输、邮寄或长期低温保存后重新培养时，才突然发现异常，甚至因病毒量激增而形成明显的细胞病变，直到细胞系丢失。但更重要的是，研究者使用被病毒污染的细胞，可能得出错误的数据或结论。
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