禽痘病毒属 (Auipoxuirus)
禽痘病毒是感染禽类的病毒，种间具有交叉血清学反应。通常不感染人与其它哺乳动物。禽 痘病毒，特别是鸡痘病毒是主要的病原体，使养鸡业遭受重大损失。 病毒粒子内含有大量脂质，但对乙醚有抵抗力。禽痘病毒于感染细胞内产生A型包涵体。 禽痘可由吸血昆虫机械传播。 本属包括鸡痘病毒、鸽痘病毒、金丝雀痘病毒、燕八哥痘病毒和火鸡痘病毒等。鸡痘病毒是 其代表种。
(一) 鸡痘病毒(Fowlpox virus)
同义名：禽痘病毒，传染性上皮瘤病毒，鸡白喉病毒。鸡痘病毒主要侵害鸡，引起皮肤型痘和粘膜型病变，后者即所谓的鸡白喉。 各种年龄和品种的鸡都易感，但雏鸡的敏感性最高。 18世纪以前，鸡痘一直是养禽业的重要传染病之一。世界上许多养禽地区几乎都曾流行过 本病。我国农区亦常见有本病发生，但因普遍采用疫苗接种措施，鸡痘的发生率已经明 显下降。 鸡痘多发于秋冬和早春。 除鸡外，野鸡(雉)和火鸡也可感染，鸽也有时发生。鸭和鹅等水禽很少发生，即使感染，也 无严重症状。
〖BT4〗 1、形态和理化学特性 病毒粒子即原生小体，又称Borrel小体，大小为280×330nm，表面呈现桑椹样。于超 薄切片中，病毒中心为电子密度高的核心，即类核体。核心对胃蛋白酶有抵抗力，呈 现 两面凹盘状，由折叠或卷曲的管状结构组成，与假牛痘病毒的S状结构相似，侧体分别位于 核心的两个凹陷内。核心和侧体外面包围有2～3层外膜(图31-2)。 在感染细胞的胞浆内包涵体中，可以看到大量的原生小体，故使包涵体呈现Feulgen阳性染 色。〖HT5”SS〗〖JZ〗图31-2 鸡痘病毒〖WB〗电镜照片〖DW〗——自李成等 〖HT5SS〗 病毒粒子核心中含有双股线状DNA基因组长约300kb,G+C=35%。鸡痘病毒DNA不具有感染性。D NA末端，同痘苗病毒一样，具有单链的发夹结构，由于这一结构的存在，原始基因组和末端 的酶切片段，经碱和加热变性后，很快可以复性。对痘病毒科内不同属中的一些成员进行基 因组酶切图谱分析，发现它们之间具有相似性，基因组中间部分的核苷酸序列比较保守 ，而基因组的两端在长度和核苷酸序列上差异较大。一般认为，基因组内部结构，即保守 区的DNA序列，编码病毒DNA复制、转录和增殖等一些重要酶类，两端的侧翼区与病毒的毒 力、宿主范围相关，具有病毒种属特异性。 鸡痘病毒类脂含量极高，占其重量的1/3，其中约一半为角鲨烯。 现已分析出鸡痘病毒的28种多肽，分子量由10～135kDa不等。 Mishrq等(1994)应用聚丙烯酰胺凝胶电泳对鸡痘病毒疫苗株(TVRJ)和两株自然分离株进行 蛋白质分析，结果表明，三株病毒在75%～15%凝胶中电泳，考马斯亮蓝染色分别产生45、 37 、39三条带。免疫斑点试验证明，大多数的蛋白质多肽，具有免疫原性。但疫苗株与分离株 ，分离株与分离株之间在蛋白质抗原性方面有所不同。 鸡痘病毒抵抗乙醚，对氯仿敏感，但曾报道某些毒株对乙醚的抵抗力不强，鸡痘病毒可耐1% 石炭酸和1∶1 000福尔马林达9天之久。鸡痘病毒对干燥具有强大抵抗 力，痂皮内的病毒可以 活存几个月。但在鸡粪和泥土中，活力通常不超过几周。60℃和50℃加热，分别可在10分 钟 和30分钟内使其灭活。对于已由包涵体中脱出的病毒粒子，1%～2%苛性钾或苛性钠呈现明显 的灭活作用。 冷冻干燥和50%甘油盐水可使鸡痘病毒长期保持活力达几年之久。
〖BT4〗2.培养 电镜观察鸡胚绒毛尿囊膜上的鸡痘病毒感染，可见病毒在感染后2小时内即被绒毛尿囊膜的 外胚 层细胞吞饮。经48小时的潜伏期，于胞浆内散在的“工厂区”内出现未成熟的病毒粒子。 病毒粒子由双层膜围绕，中心为类核体。感染72小时后，胞浆中出现由许多层紧密编织的中 心性膜组成的髓鞘结构，又称微管结构。于感染后96小时出现包涵体，包涵体内含有成熟的 病毒粒子。约于感染后120～140小时，病毒粒子脱离包涵体，移向胞膜，并从细胞表面出芽 ，又获得一层厚厚的外膜。 鸡痘病毒易在鸡胚绒毛尿囊膜上生长，并可于3天内产生白色隆起的大型痘斑。痘斑中心随 后坏死，色泽变深。 鸡痘病毒易在组织培养的鸡胚细胞内增殖，产生明显的细胞病变，并可在感染细胞的胞浆内 看到包涵体。
〖BT4〗3.血凝性 鸡痘病毒具有血凝性。细胞培养物内的病毒增殖可用血细胞吸附试验测出。
〖BT4〗4.病原性 皮肤型鸡痘潜伏期为4～8天。病毒侵入皮肤后，由于病毒增殖，上皮细胞增殖而在鸡冠、肉 髯以及口角、 鼻孔和眼周围的皮肤上出现增殖性病变——红色突起的圆斑，继则变为上皮瘤，直径约5～6 毫米。这些病变在触摸时有坚硬感，呈现灰黄色。1～2天后，痘上皮瘤由痂皮被覆。在第一 批痘病变附近又发生新的痘疹，结果在冠和肉髯表面形成一大片的痂皮。痘病变也可能出 现于眼结膜、角膜以及体躯其它部位的皮肤上。痂皮脱落部形成瘢痕，有时成为久不愈合的 溃疡。病程约3～4周。病鸡消瘦，产蛋停止，常需1～2个月才能恢复。 除上述的皮肤型鸡痘外，还常见到白喉型鸡痘。先在口腔和咽喉部粘膜表面出现黄白色稍 突起的小结节，随后增大融合而成一层黄白色干酪样假膜，覆盖于粘膜表面。撕去假膜， 则露出红色的出血性溃疡面。假膜扩大和增厚，可能阻塞口腔和咽喉，导致呼吸和吞咽困难 ，病鸡发出咯咯声。白喉型的死亡率较高，有时达30%～50%。 取病变部作组织学检查，感染上皮细胞呈典型的空泡化或发生水肿样变性，胞浆内有大型 的嗜伊红性包涵体。Allwright等(1994)报道有2群驼鸟发生禽痘病毒感染，临床症状 与鸡痘相似，并从病变组织中分离出鸡痘病毒。将含病毒材料涂于划破的冠、皮肤和粘膜 上时，几乎可使各种鸟类发生实验感染，症状与自然病例相似。
〖BT4〗5.生态学 鸡痘主要因与病鸡发生直接接触而感染。白喉型病鸡的呼吸道渗出液中含有大量病毒，可因 污染饮水、饲料和用具等而发生间接感染。鸡痘病毒不能侵入未破损的皮肤和粘膜，所以一 般认为，感染是经皮肤或粘膜上的微小擦伤或剌伤而发生的，但病毒也可以经毛囊侵入。吸 血昆虫，包括蚊、蝇、蜱、虱等呈现一定的病毒传播作用。野鸟及鸭、鹅等动物在传播疾 病中的作用尚待证实。
〖BT4〗6.免疫 康复鸡具有终生免疫力。人工免疫预防也有良好效果。当前应用的疫苗有鹌鹑化弱毒疫苗 、鸡胚化弱毒疫苗、组织培养弱毒疫苗和鸽痘疫苗等。 鹌鹑化弱毒疫苗：是将鸡痘病毒连续通过鹌鹑胚致弱而育成的弱毒株。制苗时，将弱毒株接 种11～12日龄鸡胚绒毛尿囊膜。4～5天后收获水肿、增厚或有痘斑的绒毛尿囊膜，制成冻干 苗 或甘油苗。应用时剌种于鸡的翅膀内侧无血管处皮下，每只鸡剌种一次。接种后约一周，局 部出现绿豆大痘疱，以后逐渐结痂。这种疫苗比较安全，免疫期约5个月。也可用于火鸡。 鸡胚化弱毒疫苗：是将鸡痘病毒连续通过鸡胚致弱而育成的弱毒株。这种疫苗的免疫原性较 好，免疫期6个月以上，但对幼鸡常有较高毒力。组织培养弱毒疫苗：是将鸡痘病毒连续 通 过细胞培养物减毒而育成的弱毒株，例如通过200～400代的HP1细胞培养，可供饮水免 疫，可用于5日龄雏鸡，安全有效。但需在3～4周后作第二次免疫。也有将火鸡痘病毒适应 猪肾细胞培养物40代而育成的弱毒株。 鸽痘疫苗：是一种异型疫苗，即用鸽痘病毒给鸡接种。制苗时将鸽痘病毒接种鸡胚绒毛尿囊 膜、鸡胚细胞和鸭胚细胞培养物。这种疫苗比较安全，免疫期约6个月，也可用于火鸡和鸽 。上述鸡痘疫苗已被成功地与新城疫和/或马立克疫苗联合应用，但需用非肠道接种 途径。 随着对鸡痘病毒等禽痘病毒分子生物学研究的逐步深入，近些年来，研究开发禽痘病毒，尤 其是鸡痘病毒作为一种新的病毒载体，研究制备禽类基因工程重组疫苗或哺乳动物的非 复制型重组病毒疫苗，日益受到研究者的重视。已有多种病毒的保护性抗原基因，得到表达 ，如禽流感病毒HA基因、鸡新城疫病毒的F、HN基因、马立克氏病毒的PP38基因等。在美国 应用鸡痘病毒为载体，研制的新城疫重组疫苗，已进入免疫试验阶段。
〖BT4〗7.诊断 根据临床症状和发病情况，常可作出正确诊断。应用组织学方法寻找感染上皮细胞内的大型 嗜酸性包涵体和原生小体，也有较大诊断意义。剪取痘病变组织，用切面在玻片上涂成涂 片后，用Mopoeov或Fontana法染色，极易见到单在、短链和成堆的原生小体。 (1)病毒的检出和分离： 应用灭菌的剪刀切取痘病变部，深达上皮组织，以新形成的痘疹最好。将其制成超薄 切片后作电镜检查，直接检查病毒粒子，或者用乳钵或组织研磨器研磨并低速离心后取其上 清液作负染后电镜检查。 分离病毒时，将痘病变组织置于灭菌乳钵内，加入石英砂后充分研磨，并加入Hanks液、生 理盐 水或肉汤(每毫升含青、链霉素1 000单位或1 000微克)，作成10%乳剂。室温感作1～2小时 后低 速离心沉淀，吸取上清作接种用。如为白喉型病变，则可撕取口腔或咽喉部的假膜，如上方 法制备乳剂。随后用其接种鸡胚、幼鸡、鸡胚细胞或鸡胚肾细胞。 ①鸡胚接种：选用9～12日龄鸡胚，接种01毫升病料乳剂于绒毛尿囊膜上。接种后将鸡胚 置3 7℃继续孵育5～7天，检查绒毛尿囊膜上是否出现白色灶状痘斑。初代接种有时不出 现典型病变，可取接种部绒毛尿囊膜作组织学或电镜检查，或将其磨碎后作成乳剂，继 续传代适应。②幼鸡接种：用细针将鸡冠轻轻划破，随后涂抹上述乳剂。易感鸡在接种5 ～10天后于接种部产生病变，并常扩散至冠和身体的其它部位。 ③细胞培养物接种：鸡痘病毒易在原代鸡胚细胞和鸡胚皮肤细胞内增殖，并在接种后2～6天 内产生细胞病变——细胞变圆，折光性增强，随后变性破坏。在接种后48小时出现胞浆内包 涵体。 分离获得病毒以后，即可根据上述鸡痘病毒的形态和理化学特性加以鉴定。 (2)血清学鉴定： 取自然或人工感染后1～2周的病鸡血清作为免疫血清。将痘疹、痘疱、白喉型假膜或感染的 绒 毛尿囊膜作成乳剂后与抗鸡痘免疫血清作琼脂扩散试验，常可在24～48小时内出现1～2条( 有时多 达5条)沉淀线。琼脂凝胶由1%优质琼脂、8%NaCl和001%硫柳汞配制而成。如将上述病料 乳剂先作超声波处理，随后加入1/2量的氟碳(Genetron 113)，匀浆化后，离心沉淀，吸取 上层水相。再加1/2量的碳氟重复如上处理，用其上层水相作抗原，可以明显提高阳性检出 率。 这种初步提纯抗原也可用于包被醛化红细胞，作间接血凝试验，用以检测抗体。抗体出现于 感染后1周，持续约15周。 以提纯的鸡痘病毒蛋白(10mg/ml)包被反应板，检疫免疫接种或自然感染鸡的血清抗体，具 有较高敏感性和特异性，可用于实际免疫监测。 如作中和试验，可于病料乳剂中加入免疫血清，感作后接种鸡胚或细胞培养物。 应用荧光抗体或酶标抗体检测涂片或切片中的病毒粒子或病毒抗原，也可获得较好结果。 〖BT(3+1〗
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