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马动脉炎病毒(二)



录入时间:2009-7-7 9:58:30 来源:青岛海博

 
  5.抵抗力病毒粒子有一层脂质囊膜,所以对乙醚、氯仿等脂溶剂敏感。去氧胆酸盐易使EAV灭活。病毒在低温条件下极稳定,但不耐热。-30℃保存7年仍有活性,4℃可存活35天,但在37℃下仅能存活2天,而56℃30分种就可使其灭活。病毒对酸敏感。对05mg/ml浓度的胰蛋白酶有抵抗力,但易被高浓度的胰蛋白酶所灭活。
 
  6.病原性和流行病学马是EAV唯一的自然感染宿主,感染马发生严重疾病,临床上主要表现为厌食、水肿和发热。组织学病变主要在血管系统,特别是小动脉的坏死。妊娠母马常发生流产。人工接种可使驴100%感染,接种病毒后,14日内均可从鼻腔、血液和生殖道中分离到病毒。病毒在驴体内的增殖类似于马,接种10天后出现血清阳转,临床上除发热外没有其它发病症状。EAV对驴的致病性尚需进一步研究。马动脉炎存在于美国、奥地利、法国、印度、意大利、瑞典、瑞士和英国等国家。美国的标准种马中存在很高比例的隐性感染。公马感染后可成为带毒者,病毒存在于许多公马的生殖器官,使其成为感染的传播者,在交配或用感染马精液进行人工授精时,病毒可传染给易感母马,并导致发病。带毒种公马在病毒的持续存在和传播过程中起着十分重要的作用。1993年英国首次暴发的马动脉炎就是由感染精液在人工授精时引发的。从当时的精液中已分离到EAV。有人认为睾丸酮在建立和维持种公马的带毒状态是必需的,因为去势公马接种EAV后并不发生持续性感染。EAV具有高度接触传染性,呼吸道吸入、交配和人工授精是主要的传播途径。人工接种病毒于怀孕母马及幼驹,可使50%的幼驹死亡,母马则发生流产。本病的潜伏期为3~5天。病马肯定发热,但其它症状则取决于动脉被损害的部位及程度。人工接种EAV强毒2天后可出现病毒血症,并持续至少9~19天。死亡病例的其它症状包括:明显的结膜炎以及眼睑和瞬膜水肿,过多的流泪。鼻粘膜充血并有浆液性分泌物。常见呼吸困难。病马明显衰竭,并常伴发轻重不一的腹痛和水泻以及躯干水肿。偶尔可见角膜炎、黄疸。病马出现以淋巴细胞减少为特征的泛白细胞减少症。临床病期约14天。所有年龄的马都易感,但以怀孕母马为最严重,幼驹以及患有严重寄生虫病的马匹也易发生严重感染。人工感染可导致死亡,但自然发病的死亡率较低。易感怀孕母马的流产率可达90%以上,流产发生在感染后的10~33天,通常出现在临床发病期或恢复早期。EAV可以突破胎盘屏障而感染胎儿,胎儿常在发生流产之前就已死亡。流产胎儿水肿,呼吸道粘膜和脾包膜上有出血点。不论是流产胎儿或已在子宫内死亡的胎儿,都没有特征性的动脉炎病变。在胎儿的肝、脾和淋巴结中找不到核内包涵体,但易从流产胎儿(特别是其脾脏)中分离出病毒。死亡病例最主要的剖检变化是全身小动脉管内肌层细胞的坏死,内膜上皮病变导致特征性的出血和水肿以及血栓形成和梗死。常见大叶性肺炎和胸膜渗出物。全身性动脉炎可导致所有浆膜和粘膜以及肺和中隔等的点状出血。肾上腺上也有出血。在心、脾、肺、肾、怀孕母马的子宫、眼结膜、眼睑、膝关节或跗关节以下的皮下组织以及阴囊和睾丸内,均能发现出血性及水肿样变化。浆膜腔中含有大量富含蛋白质和纤维絮状物的液体。末期病变包括淋巴结的大量坏死以及盲肠和结肠的粘膜坏死。恢复期病马的慢性病变包括广泛的全身性动脉炎和严重的肾小球性肾炎。在心血管系统的绝大多数部位中都可发现病变和病毒复制。EAV进入机体后,首先感染肺部的巨噬细胞,然后扩散到支气管淋巴结,在巨噬细胞及内皮细胞中发生病毒复制,病毒继而也在其它一些器官的中层肌细胞、间皮和上皮细胞内复制。血栓和梗死常常发生在肠管和肺脏,也出现在所有伴发水肿的器官。在实验感染后10天,静脉和淋巴管的病变已大部分消退,但动脉管的坏死仍较严重。一般需在感染后2个月,动脉才能再生和恢复。
 
  7.免疫学和血清学易感马在自然感染康复后或在用弱毒疫苗免疫接种后,都可产生坚强而持久甚至终生的免疫力。用病毒中和试验、补体结合试验、蚀斑减数试验、琼脂扩散试验和间接免疫荧光技术,都可检出EAV的抗体,也可应用这些方法鉴定EAV。现已公认50%终点蚀斑减数试验是一种比较敏感的病毒中和试验。细胞培养的病毒液经超声波处理后,就是很好的补体结合和琼扩抗原。McCollum等(1970)将Bucyrus原型毒株连续通过原代马肾细胞131代(HK131),随后又通过原代兔肾细胞111代(RK111),育成一个弱毒变异株。用200个TCID50的病毒量肌肉接种易感马和怀孕马,均安全。用强毒攻击,证明在接种后4天就有部分免疫力,接种后10天,产生完全的免疫力,对怀孕母马也无任何不良反应。免疫接种后1~3年内攻击强毒,注苗马仍有完全的免疫力。疫苗产生的中和抗体最长可以持续7年,说明弱毒疫苗具有持久免疫力。但鼻内喷雾接种这种弱毒疫苗的马不能产生坚强有效的免疫力。弱毒株在马匹连续传6代,证明这株弱毒没有返祖现象。此外,还证明注射疫苗的马并不排毒和感染与其同居饲养的易感马。幼驹从母马获得初乳抗体的保护力至少可以维持2~4个月。马驹的免疫接种应在6月龄时进行。
 
  8.诊断临床观察必须与实验室检验相结合,才能鉴别临床症状与EA相似的其它疾病,如马鼻肺炎、马流感和非洲马瘟等。
(1)病料采取:急性病例采取全血(加肝素或枸橼酸盐抗凝)或沉淀白细胞层,以及鼻分泌物,也可采取流产胎儿的脾脏。尸体剖检时采取肺、脾和淋巴结。这些病料制成的组织悬液是较好的病毒分离材料。此外,也可采取可疑病例血清,检测特异性抗体。
(2)病毒分离:初代分离培养最好应用马源细胞,例如马肾、马睾丸和马皮肤细胞。已在马源细胞上适应的病毒,容易在LLCMK2、BSC1、Vero以及BHK21等传代细胞和兔肾原代细胞上增殖。如有病毒,一般在接种后3~5天出现CPE。此外,EAV还能在马源细胞以及其它细胞(如BHK21等)中产生蚀斑,故可利用蚀斑技术进行病毒定量测定。
(3)病毒鉴定:主要应用各种血清学试验,包括中和试验、补体结合试验和蚀斑减数试验等,其中以蚀斑减数试验为最敏感。其操作步骤类似于EEEV(详见前述)。应用这一技术也可检测血清中的中和抗体滴度,其抑制50%蚀斑单位数的血清最高稀释度的倒数,就是该血清的抗体滴度。已知的小实验动物和鸡胚都不产生感染症状或病变,但可应用家兔、豚鼠、仓鼠和小鼠制备抗病毒血清。

 

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