金黄色葡萄球菌的检测（FDA与ISO对比）

   
   金黄色葡萄球菌—概述
根据《伯杰氏鉴定细菌学手册》，按葡萄球菌的生理化学组成，将葡萄球菌分为金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)、表皮葡萄球菌(S. epidermidis)和腐生葡萄球菌(S. saprophyticus)，其中金葡多为致病性菌，表葡偶尔致病。
金黄色葡萄球菌是人类化脓性感染中最常见的病原菌。可引起局部化脓性感染，如疖、痈、皮下脓肿、外科切口及烧伤创面的感染；也可引起肺炎、伪膜性肠炎、肾盂肾炎、心包炎等多系统的化脓性感染；还可引起败血症、脓毒症等全身性感染。葡萄球菌的致病力强弱主要取决于其产生的毒素和侵袭性酶。  
金黄色葡萄球菌—生物学特性
金黄色葡萄球菌呈球形，直径0.8μm左右，排列成葡萄串状 ，无芽孢，无荚膜。
金黄色葡萄球菌—生长特性
金黄色葡萄球菌在肉汤中呈浑浊生长，在胰酪胨大豆肉汤内有时液体澄清，菌量多时呈浑浊生长。
金黄色葡萄球菌检验—方法适用性
MPN法：适用于检测带有大量竞争菌的食品及其原料和未经处理的含少量金黄色葡萄球菌的食品。
直接平板计数法：适用于检查金黄色葡萄球菌数不小于10/g（ml）的食品。
增菌培养法：适用于检查含有受损伤的金黄色葡萄球菌的加工食品。

             金黄色葡萄球菌检验——直接平板计数法
                   （FDA BAM &ISO）
1.检样（50g+450mL稀释液）
2. 适当十倍稀释样品
3.选择2~3个连续适宜稀释度
4.吸取1ml菌液按照0.3mL、0.3mL、0.4mL分别涂布于
3块90mmBaird-Parker平板上（做平行试验）
       35℃ ，45~48 h
5.确证试验
报告
FDA BAM 金黄色葡萄球菌检验—MPN法
1.检样（50g+450mL稀释液）
2.适当十倍稀释样品
3.选择3个适宜的连续稀释度的样品稀释液，
每个稀释度接种三管10% NaCl TSB肉汤，
每管接种1mL
             35℃ ，48 ±2 h
4.从生长的管中接种1环划线于 Baird-Parker平板上
         35℃ ，48 h
5.确证试验
6.报告
FDA BAM 金黄色葡萄球菌确证试验
1.凝固酶试验
方法：从平板上至少挑取1个可疑金黄色葡萄球菌菌落，移种到TSB/BHI肉汤中，置35℃培养18-24h。取肉汤培养物0.3mL同0.5mL凝固酶试验兔血浆充分混合，置35℃培养，定时观察是否有凝块形成，至少观察6h。试验中需同时做已知阳性和阴性对照。
结果判定：以内容物完全凝固，使试管倒置或倾斜时不流动为阳性。部分凝固（2+和3+）的必须进行生化鉴定加以证实。
FDA BAM金黄色葡萄球菌确证试验
2.革兰氏染色
对所有的可疑培养物都要进行革兰氏染色。
3.生化鉴定
 过氧化氢酶试验
 葡萄糖厌氧利用试验
 甘露醇厌氧利用试验
 金葡溶菌酶敏感性试验
 耐热核酸酶试验（辅助）
ISO 金黄色葡萄球菌检验—MPN法
1.检样（xg+9xmL稀释液）
2.适当十倍稀释样品
3.选择3个适宜的连续稀释度的样品稀释液，
每个稀释度接种三管
modified Giolitti and Cantoni broth，
                  37℃ ，24~48 h
4.从变黑或出现黑色沉淀的管中
接种1环培养物于 Baird-Parker平板上
               37℃ ，48 h
5.确证试验
6.报告

 

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