1.玻璃器皿〖HT〗组织培养用的玻璃器皿要求比较严格,要用耐酸、耐热和透明度强的中性硬质玻璃,尤其是培养组织细胞用的瓶子,更应注意质量,而且表面应平坦光滑,以利于细胞贴壁增殖和观察。用过的玻璃器皿用清水冲洗后,放在以优质洗衣粉配成的1%水溶液内蒸煮半小时,随后洗刷,并用清水和双馏水分别冲洗5～6遍以上,再浸泡在双馏水中1天以上。此后捞出,并用去离子水冲洗3～4遍以后,晾干或烤干,等待包扎和灭菌。新购的玻璃器皿,在清除污物和晾干后,浸泡于硫酸-重铬酸钾清洗液内1天以上,捞出,用清水冲洗后,再按上述方法洗刷,冲净。带毒的玻璃器皿需先浸泡于5%来苏液或1%盐酸溶液(依病毒种类而定)中1天以上或高压消毒,此后再按上法洗刷和冲净。洗刷晾干的玻璃器皿,经妥善包装后,以160～170℃干热2小时的方法灭菌。
2.塑料制品〖HT〗细胞培养瓶(管、板)的塑料化,已是必然的发展趋势。用于组织培养的塑料制品多以优质聚苯乙烯为原料,随用途制成各种不同的形状和规格,其成品均经无菌包装,工作时可直接启封使用,既方便又省力。通常这些塑料制品多为一次性使用,但为了节约也可重复利用。用过的染毒培养板,通常浸泡于5%甲醛溶液中过夜消毒。塑料制品的洗刷方法与玻璃制品相同,但灭菌方法不同。即将清洗晾干后的器皿,浸入细胞培养用水配制的70%浓度的高纯度乙醇溶液中,至少浸泡24小时,临用前捞出,甩净培养瓶内的残液,包以灭菌的牛皮纸后,置37℃温箱内,待其完全干燥后即可使用。这种灭菌方法并不十分确实,有时出现污染。培养板(皿)置于紫外灯下(距离20～30cm)照射消毒,时间为05～1小时,照射后即刻使用。
3.橡皮制品〖HT〗应选用对细胞毒性较小的软质橡皮管和橡皮塞。新购的橡皮制品先在2%的氢氧化钠溶液内煮15分钟,以自来水冲洗后再用4%的盐酸溶液煮15分钟。橡皮管在煮时务使管内不含气泡。用自来水和双馏水分别冲冼5～7遍后再浸泡在双馏水中1天以上,随后捞出,用去离子水冲洗2～3遍后,晾干包装。15磅高压灭菌20分钟。用过的橡皮制品先经高压或煮沸1小时灭菌,随后在以优质洗衣粉配成的1%水溶液内煮半小时,再用刷子刷净,自来水冲冼数遍后用双馏水冲冼1遍,并于双馏水中浸泡1天以上,随后捞出,用去离子水冲洗2～3遍后,如上晾干包装和灭菌。
4.滤器〖HT〗常用的有蔡氏滤器、玻璃滤器和微孔滤膜。(1)蔡氏滤器:由石棉板制成,夹于金属器中使用。一般可分为大孔径的K型,用于去除较大的颗粒和杂质;孔径较小的EK型则用以除菌。这种滤器适于滤过大量样品,先用K型滤过澄清,后用EK型滤过除菌,以免堵塞滤板。(2)玻璃滤器:系用均一的玻璃粉末烧结而成的多孔性滤板。国内产品按孔径大小分为G1、G2、G3、G4、G5和G6等几型。G1～G4型的孔径为5～200μm,G5型的孔径为15～25μm,G6型的孔径在15μm以下。上述型号大致相当于国外的EC(170～220μm)、C(40～60μm)、M(10～15μm)、F(4～55μm)、VF(2～25μm)、UF(09～14μm)。通常应用G1～G4型作初滤澄清之用,G5型可部分除菌,G6型则作过滤除菌用。玻璃滤器最常用于培养液的过滤除菌。新购置的玻璃滤器先用清水洗净。待干后,于滤器的玻璃斗内装满硫酸－重铬酸钾清洗液,下接滤瓶,让清洗液自然滴落至尽,随后加入1mol/LNaOH液,也任其自然滴落。此后用馏水充分冲洗后,再装满馏水,并在下面的滤瓶上接抽气机,造成负压使馏水不断通过滤板。随时补加馏水,约5～6次。最后再加三馏水或去离子水,也用负压抽滤。测定滤液的pH,直至滤出的馏水的pH与加入时的馏水的pH相同。此时即可晾干包装,并高压灭菌。(3)微孔滤膜:系用醋酸纤维酯和硝酸纤维酯的混合物制成的薄膜,具有025μm至10μm不同的孔径。近年上海新亚净化器械厂已生产出合格的孔径02、03、045、065、080、12μm的多种滤膜,其直径有25～180mm多种规格。除菌过滤可用孔径02μm的薄膜。大孔径滤膜可用于澄清。微孔滤膜安装在特制的过滤器中使用,筛板的孔径不得超过08mm。小量液体的除菌过滤,可用连接于注射器上的特殊小型滤膜过滤装置,包装灭菌后即可使用,极为方便适用。(4)滤器清洗法:用过的滤器必须立即处理。如果沾有传染性物质,应将滤器和滤板煮沸或浸泡于消毒液内消毒(石棉板和滤膜在消毒处理后即行废弃),再经清洗,包装和灭菌后备用。玻璃滤器用过后,先用含1%-2%硝酸钠比重为184的浓硫酸溶液抽洗数分钟,再用馏水抽洗,然后用1∶1氨水溶液抽洗,以中和其酸性,最后用馏水彻底抽洗。当滤器沾污较多蛋白质时,应在清洗前先置于pH85胰蛋白酶溶液中浸泡,在37℃下消化24小时后,再行抽洗。
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