中华人民共和国进出口商品检验行业标准 出口食品中弯曲杆菌检验方法——2

附　录 A 　培养基和试剂 　　(补充件) 
A1　弯曲杆菌增菌肉汤 　　
基础液(布氏肉汤) 　　　
胰蛋白胨: 10.0g
蛋白胨: 10.0g 
葡萄糖: 1.0g 　　　　
酵母浸膏: 2.0g 　　　　
氯化钠: 5.0g 　　　　
亚硫酸氢钠(NaHSO3) : 0.1g 　　　　
蒸馏水: 1000mL 　
　将各成分溶于蒸馏水中。121℃高压灭菌15min。最终pH7.0±0.2,分装于规格适宜的烧瓶。 　　
FBP浓原液 　　　
硫酸亚铁(FeSO4): 2.5g 　　　
焦亚硫酸钠(Na2S2O5): 2.5g 　　　
丙酮酸钠(sodium pyruvate): 2.5g 　
　将各成分溶于100mL蒸馏水中,经0.20μm滤膜过滤除菌,存于4℃。每100mL经灭菌的基础液中加1mL,混匀。 　　
1号抗生素溶液 　　　　
万古霉素：0.75 g 　　　　
三甲氧苄氨嘧啶乳酸盐(trimethoprimlactate): 0.38g 　　　　
多粘菌素B: 250 000 IU 
   将各成分溶于500mL蒸馏水中,经0.20μm滤膜过滤除菌。每100mL经灭菌的基础液中 加1mL。 　　
2号抗生素溶液 　　　　
利福平(rifampicin) : 0.2g 　　　　
三甲氧苄氨嘧啶乳酸盐：0.2g 　　　　
多粘菌素B: 200 000 IU 　　　　
放线菌酮(actidione) : 2.0g 　
　将各成分置200mL容量瓶中,加入95%乙醇50mL,振摇使溶解,加入蒸馏水至200mL。过滤除菌,每100mL经高压灭菌的基础液中加1mL。 
A2　弯曲杆菌分离琼脂(改良Skirrow氏培养基) 　
　基础液 　　　　
蛋白胨：15.0g 　　　　
胰蛋白胨：2.5g 　　　　
酵母浸膏：5.0g 　　　　
氯化钠：5.0g 　　　　
琼脂：15.0g 　　　　
蒸馏水：1000mL 
   加热并搅拌使琼脂溶化,121℃高压灭菌15min。冷至50～55℃,最终pH7.4±0.2。 　　FBP浓原液： 　　
同A1中FBP浓原液,每100mL经灭菌的基础液中加1mL。 　　
抗生素溶液 　　　　
万古霉素: 0.5g 　　　　
三甲氧苄氨嘧啶乳酸盐：0.25g 　　　　
多粘菌素B：125000 IU 　　　　
蒸馏水：500mL 　
　将各成分溶于500mL蒸馏水中,经0.20μm滤膜过滤除菌,每100mL经高压灭菌的基础液中加1mL。 　　
冻溶脱纤维羊(或马)血 　
　将羊(或马)血反复冻融3次,使血球完全溶解,每100mL基础液中加入5mL。混匀后倒入平皿,每皿20mL。 
A3　含0.18%琼脂的半固体布氏肉汤 　
　将1.8g琼脂加于1000mL布氏肉汤(A1中基础液),加热并搅拌使琼脂溶化,分装16mm×125mm试管,每管7mL。121℃高压灭菌15min。最终pH7.0±0.2。 
A4　布氏琼脂 　
　将15g琼脂加于1000mL布氏肉汤(A1中基础液),加热并搅动使琼脂溶化,煮沸1min。121℃高压灭菌15min,最终pH7.0±0.2。 
A5　营养肉汤 　　　 
牛肉膏：3.0g 　　　　
蛋白胨：5.0g 　　　　
蒸馏水：1000mL 　
　将各成分加于蒸馏水中,并加热溶解。分装试管时,每管10mL,分装500mL三角烧瓶时,每瓶225mL。121℃高压灭菌15min。最终pH6.8±0.2。 
A6　中性红溶液 
　　将中性红2.0g溶于1000mL蒸馏水中,在培养基灭菌前加入,每100mL培养基中加入1mL。A7　氧化酶试剂 　
N,N,N,N-四甲基对苯二胺盐酸盐(N,N,N,N-tetramethyl-p-phenylenediamine·2HCl): 1.0g 　
蒸馏水：100mL 　
　这是一种应首先选用的试剂。将新鲜配制的试液直接滴于琼脂平板或斜面的培养物上。氧化酶阳性菌落显粉红色,并逐渐变紫。宜用幼嫩培养物进行试验,临用时配制试剂,但如果试剂是避光冷藏,可用7d。也可将培养物置于浸透有试剂的滤纸条上。必须用铂丝挑取培养物,用含铁的金属丝会出现假阳性反应。也可用1%N,N-二甲基对苯二胺盐酸盐(N,N-dimethyl-p-phenylenediamine hydrochloride)溶液直接加于平板或斜面培养物上。要保存培养物时,须在3min内将试剂完全倒出,因试剂对细菌有毒性。A8 亚硝酸盐检测(硝酸盐还原)试剂 甲液: 将0.02gN-(1萘)乙二胺盐酸盐[N-( I naphthyl) ethylenediamine·2HCl] 加于100mL 1.5mol/L盐酸中,在通风柜中微加热溶解　　
乙液: 将1.0 g对氨基苯磺酸加于100mL 1.5mol/L盐酸中,在通风柜中微加热溶解。   
   

 

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