钩端螺旋体可以进行人工培养，但其生长要求较高，需用含8%—10%兔血清的Korthof培养液，血清在其中所起的作用，一方面是提供钩端螺旋体生长所需的生长因子，另一方面可以中和钩端螺旋体的代谢产物，有利于钩端螺旋体的生长。
【材料】Korthof培养液，待检标本（患者血液、尿液或可疑动物的内脏）
【方法】
1、患者血液培养采集早期患者血液，无菌操作接种于2—3管Korthof培养管中，每管接种1—3滴。血培养管置28℃培养。每隔5—7天取培养物暗视野显微镜下观察有无钩端螺旋体生长，若有生长，即为分离阳性。若未见生长，需继续培养60天，仍不见钩端螺旋体方作阴性处理。
2、患者尿液培养：留取病后两周以上的患者中段尿30—50ml于无菌离心管中3500—4000r/min离心1小时。取沉渣0.3—0.5ml接种于2—4管上述培养液中，28℃孵育。每隔5—7天取材镜检。为提高检出率和减少污染，可在采集尿标本的前一天晚上给患者服用碳酸氢钠2—4g，同时，在培养液中加入100—400ug/ml5-氟尿嘧啶或1/2000的磺胺嘧啶。
3、动物肾脏培养无菌操作，采集新鲜动物肾脏（包膜完整），剪取米粒大小接种于2—3管Korthof培养管中，置28℃培养。每隔5—7天取培养物置暗视野显微镜下观察有无钩端螺旋体生长，若有生长，即为分离阳性。若未见生长，需继续培养60天，仍不见钩端螺旋体生长方作阴性处理。
4、菌株分群、分型应用分群血清与新分离的钩端螺旋体作凝集实验，确定菌群。应用交叉凝集素吸收实验或分型因子血清来确定菌型。
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