验证用微生物接种菌液的制备，必须使用5代之内的菌种。取验证（挑战）微生物菌种（大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、生孢梭菌；白色念珠菌等的新鲜培养物）至新鲜琼脂培养基中（营养肉汤、硫乙醇酸盐；改良马丁培养基中），30—35℃培养18—524h；20—25℃培养18—24h（白色念珠菌），试管培养物加入0.9%无菌氯化钠溶液约5ml或其他适宜的稀释液，制成浓菌悬液，用上述培养物进行1ml—9ml的10倍系列稀释，按《中国药典》（2005年版）规定的平皿菌落计数法测定菌数，制成每毫升含菌10—100菌落形成单位（CFU）的菌悬液。备用。
将黑曲霉菌接种至真菌琼脂斜面培养基上，20—25℃培养5—7d，使大量的孢子产生。加入3—5ml0.9%无菌氯化钠溶液，用玻璃棒将孢子洗脱。然后，用管口带有能过滤菌丝装置（如薄的无菌棉花或纱布的无菌毛细吸管）吸出孢子菌液至无菌试管内，用浊度法或《中国药典》（20058年版）规定的平皿菌落计数法测定菌数，将菌液稀释至每毫升含10—1010个。备用。
以上确定供试用的菌液（稀释菌液含10—100CFU/ml）就可作为验证用接种液，接种液要保存在2—8℃的冰箱内，可于1周内使用，但要求在每次接种时须重新计数，以确证稀释菌液的准确浓度。
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