荚膜染色法— 实验方法

   
（1）黑斯荚膜染色法 
①在荚膜菌涂片上（在空气中 自然干燥，无需加热固定）放一小块滤纸片，之后滴加结晶紫染液。 
②在火焰上微微加热，使玻片上染液 冒蒸汽为止。 
③用200g/l硫酸铜水溶液冲洗染液，切勿用流水冲洗。用吸水纸吸干后油镜检查。 
结果：菌体呈紫色，荚膜呈淡紫色或无色。 
（2）密尔荚膜染色法 
①制片。常规法制片，干后加热固定。 
②染色。加石炭酸复红液。微加热染1min，水洗。 
③媒染。加特殊媒染剂，作用0.5min，水洗。 
④复染。加碱性美蓝液，染1min，水洗。 
⑤镜检。干后油镜检查。 
    结果：菌体呈鲜红色，荚膜呈蓝色。 
（3）奥尔特荚膜染色法涂片、自然干燥、火焰 固定后滴加染液，经火焰加温使染液产生蒸汽后，继续染3min，水洗，待干，镜检。 
    结果：菌体呈赤褐色，荚膜呈黄色。 
（4）湿墨水负染法 
①加一滴墨水于洁净的载玻片上，然后挑取少量菌体与其混合均匀。 
②将一洁净盖玻片盖在混合液上，然后在盖玻片上放一张滤纸，轻轻按压以吸去多余的混合液。加盖玻片时勿产生气泡，以免影响观察。 
③高倍镜或油镜检查。 
   结果：背景灰色，菌体较暗，在菌体周围呈现明亮的透明圈。 
（5）干墨水负染法 
①加一滴60g/l葡萄糖液于洁净载玻片的一端，然后挑取少量菌体与其混合，再加一环墨水，充分混匀。 
②另取一端边缘光滑的载玻片作推片，将推片一端的边缘置于混合液前方，然后稍向后拉，当推片与混合液接触后，轻轻左右移动，使之沿推片接触的后缘散开，尔后以大约30°角迅速将混合液推 向玻片另一端，使混合液铺成薄层。 
③空气中自然干燥 。 
④用甲醇浸没涂片固定1min，弃去 甲醇。 
⑤在酒精灯上方用文火干燥 。 
⑥用甲基紫染1—2min。 
⑦用自来水轻轻冲洗，自然干燥 。 
⑧高倍镜或油镜检查。 
  结果：背景灰色，菌体紫色，菌体周围为清晰透明的荚膜。 
（6）石炭酸复红液染色法 
①取培养了72h的荚膜菌制成涂片，自然干燥（不可用火焰烘干）。 
②滴加1—2滴95%酒精固定（不可加热固定）。 
③加石炭酸复红染液染色1—2min，水洗，自然干燥 。 
④在载玻片一端加一滴墨水，用一块边缘光滑的载玻片与墨水接触，再以匀速推向另端，涂成均匀的一薄层，自然干燥 。 
⑤干燥后用油镜观察。 
   结果：菌体红色，荚膜无色，背景黑色。

 

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