一、试验用途及原理
改良胰蛋白胨大豆液体培养基(mTSB)用于产志贺毒素大肠埃希氏菌样品的制备和增菌。
胰酪蛋白胨、大豆蛋白胨在培养基中作为营养物质提供菌体生长所需要的氮源、维生素、生长因子等;氯化钠维持体系渗透压平衡;三号胆盐为抑制剂,抑制革兰氏阳性菌的生长;磷酸氢二钾为菌体生长提供相对稳定的酸碱缓冲体系;葡萄糖提供菌体生长所需要的碳源。
二、培养基配方(g/L)
胰酪蛋白胨 |
17.0 |
大豆蛋白胨 |
3.0 |
氯化钠 |
5.0 |
三号胆盐 |
1.5 |
磷酸氢二钾 |
4.0 |
葡萄糖 |
2.5 |
pH值7.4±0.2(25℃) |
三、试验方法
1、称取本品33.0g,加热溶解于1000mL纯化水中,分装,121℃高压灭菌15min,备用。
2、制备质控菌株,做10倍系列梯度稀释,选择适宜稀释度的菌悬液,接种至培养基中,并做空白对照。
3、放置于41.5℃±0.5℃恒温培养箱中,需氧培养18h-24h。
四、质控结果
接种以下质控菌株,放置于41.5℃±0.5℃的恒温培养箱中,需氧培养18h-24h。试验结果如图1所示。
质控菌株 |
菌株编号 |
接种量(CFU) |
生长情况 |
其它特征 |
大肠杆菌O157 |
ATCC 35150 |
10-100 |
+++ |
浑浊 |
大肠埃希氏菌 |
ATCC 25922 |
10-100 |
+++ |
浑浊 |
金黄色葡萄球菌 |
ATCC 25923 |
100-1000 |
- |
抑制 |
图1改良胰蛋白胨大豆液体培养基(mTSB)的质控菌株培养结果
五、试验注意事项
1、使用非一次性试管等容器进行试验时,应对容器进行无菌处理,以免增加试验的不确定性或污染。
2、灭菌结束后,应尽快取出,冷却至室温使用。
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