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猪支原体培养基的原理和使用方法

刘浩然
录入时间:2024-11-11 16:19:07 来源:青岛海博生物

一、产品用途及原理

  用途:用于培养猪支原体的基础培养基。

  原理:PPLO肉汤、脑心浸液、酵母浸粉提供氮源,维生素,氨基酸和生长因子;猪血清提供甾醇、脂质类并补充氨基酸;Hank's平衡盐维持培养基渗透压和pH值;苯酚红为染料;抑菌剂抑制杂菌生长。


二、培养基配方(g/1300mL)

PPLO肉汤

8.7

脑心浸液

8.2

酵母浸粉

5.0

Hank's平衡盐

4.475

苯酚红

0.0225

pH值7.7±0.1(25℃)


三、试验方法

  1、称取本品26.4g,加热溶解于1300mL蒸馏水中,121℃高压灭菌15min,冷却至室温,无菌操作加入433mL猪血清和1支抑菌剂(含杆菌肽0.25g、青霉素0.25g)并调节pH至7.7±0.1(25℃),混匀,分装,备用。

  2、制备质控菌株,接种至培养基中,做10倍系列稀释,稀释至10-9,并做空白对照。

  3、放置于36℃±1℃恒温培养箱中,微需氧培养7d-21d。


四、质控结果

  接种以下质控菌株,放置于36℃±1℃恒温培养箱中,微需氧培养7d-21d。猪肺炎支原体培养至12d的试验结果如图1所示。

质控菌株

菌株编号

方法

质控结果

其它特征

猪肺炎支原体

/

定量

生长良好

10-9稀释度管变黄


图1 猪支原体培养基培养猪肺炎支原体12d时的试验结果


五、试验注意事项  

  1、若使用非一次性试管等容器进行试验,容器使用前应使用蒸馏水冲洗干净,确保无洗涤液等残留物,以免增加试验的不确定性或污染。

  2、灭菌结束后,试管口会有水珠,在进行梯度稀释时,水珠很容易与空气中的细菌接触以致污染,因此,试管口应灼烧至干燥,胶塞也需过火,振荡操作后,若培养基接触到胶塞,还需再次进行灼烧操作。

  3、调节pH时,使用的酸碱试剂需是无菌的。

  4、支原体培养前应使用封口膜封口,可提供微需氧环境以及降低污染的风险。


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注:本文属海博生物原创,未经允许不得转载。

 

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