常见的细胞平衡盐溶液介绍及选择

一、常见的细胞平衡盐溶液

  平衡盐溶液（Balanced salt solution, BSS）是细胞学实验中必不可少的试剂，常用于哺乳动物细胞在体外环境时的短期维持，也可用作细胞冲洗液。BSS通常是无机盐的组合或混合物，成分主要包括钠、磷酸钠、钾、钙、镁和氯化物等。钾和钠调节渗透性和张力，而钙和镁可以保持细胞膜和内部结构的完整性，通过添加磷酸盐和碳酸氢盐，平衡盐溶液还能平衡环境pH的波动。有些BSS还会添加葡萄糖，为细胞提供能量。

  细胞培养的平衡盐溶液包括：PB磷酸缓冲液（Phosphate buffer solution，PB）、PBS磷酸缓冲盐溶液（Phosphate-buffered saline, PBS）、杜氏磷酸缓冲盐溶液（Dulbecco's phosphate-buffered saline, DPBS）、Hank's平衡盐溶液（Hank's balanced salt solution, HBSS）、Earle's平衡盐溶液（Earle's balanced salt solution, EBSS）和格氏平衡盐溶液（Geys balanced salt solution, GBSS）等。

  PB缓冲液通常由磷酸二氢钠（NaH₂PO₄）和磷酸氢二钠（Na₂HPO₄）配制而成，另外也有使用磷酸钾盐配制（即K₂HPO₄或KH₂PO₄），其配制方法和缓冲液能力与磷酸钠缓冲液相同。PB缓冲液的缓冲pH值范围非常广泛，可配制各种pH值的酸性、碱性和中性缓冲液，通常在pH为5.7-8.0之间使用。PB缓冲溶液在化学反应、合成反应等化学领域中有广泛应用，在部分抗体制剂中也有应用，但如果用其冲洗细胞，则可能会导致细胞低渗吸水，甚至胀破。

  PBS缓冲液具有与PB缓冲液相同的缓冲对：H₂PO_4-和HPO₄^2-，与PB缓冲液不同的是PBS添加了氯化钠和氯化钾来增加盐离子浓度。PBS缓冲液通常在pH为7.2-7.4使用，具有盐平衡、调节渗透压和一定的pH缓冲作用。DPBS是生物学、生物化学研究中使用较广泛的一种平衡盐溶液，DPBS和PBS的成分相同，但DPBS的Na₂HPO₄与KH₂PO₄的添加量略小。另外一部分文献将该PBS缓冲液写成D-PBS缓冲液，并强调是不含钙、镁离子的配方。DPBS主要用于胚胎学方面的研究，可作为胚胎、组织、细胞的漂洗液、冻存液和培养液。可根据需要在D-PBS中加入葡萄糖、丙酮酸钠等，以维持培养物的基本营养。

   Hank's平衡盐溶液是生物学实验中最常用的平衡盐溶液，主要成分为NaCl，KCl，KH₂PO₄，Na₂HPO₄，NaHCO₄和葡萄糖，具有维持渗透压、保持pH稳定、提供简单营养等作用。HBSS可用于多种细胞培养应用，如漂洗组织块、器官或细胞，运输细胞或组织，稀释细胞计数，以及配置其他试剂等。从成分上来说，Hank's缓冲液与D-Hank's缓冲液的一个主要区别在于D-Hank's缓冲液不含有钙离子和镁离子，原因在于钙离子、镁离子会抑制胰蛋白酶活性，因此不含钙离子、镁离子的Hank's平衡盐溶液（D-Hank's）还可用于细胞解离前清洗以及配制胰蛋白酶消化液。与PBS和DPBS相比，Hank's缓冲液更复杂，Hank's溶液中磷酸盐含量要低一些，因为该溶液添加的碳酸氢钠可以起到pH调节的作用，此外，该缓冲液还添加了葡萄糖，可为细胞提供简单的营养。

  Earle's平衡盐溶液，是细胞分离或培养中常用的磷酸盐缓冲液之一。EBSS专为CO₂环境中的细胞短期维持而设计，主要成分为葡萄糖，NaHCO₃，NaCl，KCl和Na₂HPO₄，具有维持渗透压、保持pH稳定、提供简单营养等作用，可用于体外实验中组织块、器官或细胞的漂洗、细胞或组织的运输、细胞培养用试剂的配制以及作为细胞计数的稀释液，也可用于诱导细胞自噬等领域。HBSS和EBSS两者都是多数培养基的基础溶液，主要区别是缓冲能力不同。HBSS的NaHCO₃含量较低（0.35克/升），其缓冲能力较弱，一般用空气平衡，即利用空气中的CO₂使溶液pH值平衡。EBSS含有高浓度的NaHCO₃（2.2克/升），其缓冲能力较强，溶液pH值需在5％的CO₂培养箱中才能达到平衡。如果希望在CO₂培养箱中保存组织，需要用EBSS。如果仅仅是清洗将要在细胞培养基中储存的组织，选择HBSS液即可。

  此外，EBSS和HBSS都可以选择含或不含钙镁离子及酚红的溶液，使用时应根据实验的需要进行选择。酚红的添加主要是指示溶液的酸碱度变化，但由于酚红会干扰流式细胞检测，一般在做流式细胞检测时，使用无酚红产品。钙镁离子会抑制胰蛋白酶的活性，故含有钙镁离子的缓冲液通常用作运送介质、试剂的制备；不含钙镁离子的缓冲液，通常用于细胞清洗。值得注意的是含有葡萄糖和碳酸氢钠（NaHCO₃）的溶液不能进行高压灭菌，如果是自行配制，应选择过滤除菌，如果是直接订购产品，要注意进行无菌分装。

二、产品展示

  青岛高科技工业园海博生物技术有限公司生产的PBS和DPBS缓冲液产品，均采用过滤除菌工艺，在百级洁净室中进行无菌灌装，每批产品均已通过无菌测试，并且经过严格的质量控制测试，确保产品性能和批次间一致性，亦进行了pH、渗透压、内毒素等测试，非常适合在细胞培养中使用。

  我公司生产的的PBS和DPBS缓冲液产品如图1，内毒素含量不超过0.01EU/mL，检测结果如图2，详情请参考：PBS和DPBS缓冲液产品。

图1 商品化的PBS和DPBS缓冲液

图2 内毒素检测结果

1~5：浓度分别为0EU/mL、0.01EU/mL、0.025EU/mL、0.05EU/mL和0.1EU/mL的内毒素标准液检测结果；6：我公司生产的PBS产品内毒素检测结果。

相关产品：

磷酸盐缓冲液PBS（pH7.2）（细胞缓冲液）-点击查看产品详情

Dulbecco's磷酸盐缓冲液（DPBS）（不含氯化钙和氯化镁）-点击查看产品详情

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