一、培养基用途：
用于克罗诺杆菌的选择性增菌培养。
二、原理：
胰蛋白胨在培养基为微生物生长提供所需的碳源、氮源、维生素、氨基酸及生长因子；氯化钠维持渗透压；磷酸盐提供相对稳定的酸碱缓冲体系，月桂基磷酸钠抑制非大肠菌群类细菌的生长
按照GB4789.28-2024《食品安全国家标准 食品微生物学检验 培养基和试剂的质量要求》中改良月桂基硫酸盐胰蛋白胨肉汤-万古霉素（mLST-vm）质量控制方法，与旧版国标GB4789.28-2013相比，存在一点改动，新版国标删除了大肠埃希氏菌ATCC 25922，将旧版国标的附录D和附录E合并为新版的附录F一种质量控制方法。现按照新版国标对其进行检测。
三、培养基成分
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成分 |
含量（g/L） |
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胰蛋白胨 |
20.0 |
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氯化钠 |
34.0 |
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乳糖 |
5.0 |
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磷酸氢二钾 |
2.75 |
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磷酸二氢钾 |
2.75 |
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月桂基硫酸钠 |
0.1 |
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pH 6.8±0.2 25℃ |
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四、操作方法
1、称取本品64.6g，加热溶解于1000ml蒸馏水中，分装锥形瓶，每瓶100ml，121℃高压灭菌15分钟，冷却至45-50℃时，每100ml培养基加入过滤除菌的万古霉素（1mg/ml）1支，混匀分装无菌试管，每管10ml备用。
2、制备工作菌悬液。
3、接种
目标菌（阪崎克罗诺杆菌ATCC 29544）：接种10CFU-100CFU/管，接种体积不超过1mL，接种两个平型管。同时将1mL菌悬液（与试管同一稀释度）倾注平板（或适宜稀释度0.1mL涂布平板）接种两个平板，做接种量计数用。
非目标菌（粪肠球菌ATCC 29212）：接种1000CFU-5000CFU/管，接种体积不超过1mL，接种两个平型管。同时将1mL菌悬液（比待测培养基试管接种小10-100倍稀释度）倾注平板（或适宜稀释度0.1mL涂布平板）接种两个平板，做接种量计数用。
图一： mLST-vm培养基44±0.5℃培养24±2小时后
4、44±0.5℃培养24±2小时后转接平板。
目标菌（阪崎克罗诺杆菌ATCC 29544）：吸取10ul培养液均匀涂布或螺旋涂布到阪崎肠杆菌显色平板。（注：此处与旧版国标不同，旧版国标为取10ul培养液划线接种至阪崎肠杆菌显色培养基）
非目标菌（粪肠球菌ATCC 29212）：吸取10ul培养液均匀涂布或螺旋涂布到非选择性平板上（如：TSA）。
5、将转接后的平板置于36±1℃培养24±2小时。
图二：试管转接平板后试验现象
五、实验结果
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质控菌株 |
菌株编号 |
接种量（CFU） |
质量评定标准 |
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阪崎克罗诺杆菌 |
ATCC 29544 |
10-100 |
转接后在阪崎肠杆菌显色培养基上为蓝绿色菌落，菌落数应>10CFU |
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粪肠球菌 |
ATCC 29212 |
1000-5000 |
转接后在TSA上菌落数应<100CFU |
相关产品：
相关标准：
GB4789.28-2024《食品安全国家标准 食品微生物学检验 培养基和试剂的质量要求》
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