一、版本概况
GB4789.4食品中沙门氏菌检验标准从1994版到即将实施的2024版,总共经历了6个版本的更新。与2016版本相比,2024版本主要在一些操作细节、使用培养基的调整及鉴定方法做了变更,预计将在2024年8月份正式实施。
二、变更内容
1.样品预增菌改动
(1)增加乳粉检验前处理的说明,25g乳粉加入至225mL BPW液体表面,暂不调整pH也不混匀,室温静置60±5min后再混匀,36℃培养16-18h。此操作是经过实验室验证,有助于受损沙门细菌的恢复,减少对沙门氏菌的损伤,提高检出率。
(2)冷冻产品的解冻温度由45℃以下更改为40-45℃,2-5℃更改为2-8℃,主要是更加贴合冰箱的冷藏温度。
2.选择性增菌步骤改动
(1)RVS替代原来的SC培养基,一方面是因为SC培养基里面的亚硒酸氢钠有剧毒,对人体健康和环境危害比较大,且储存不稳定易分解,另一方面受社会现状的影响,目前疾控监测伤寒沙门氏菌导致的发病率并不高,适合伤寒沙门氏菌生长的SC相对来讲适用性不是很强了,更换为RVS培养箱相应也可以提高检出率(RVS具有更强的选择性,抑制杂菌的效果要强于SC)。同时培养温度变为42℃,接种体积变为0.1mL。
(2)TTB培养温度增加了可选择36±1℃进行培养,主要是考虑到了样品背景菌的影响。对于进行一定加工过的样品,通常背景菌含量较少,干扰性不强,在36±1℃培养即可。而对于背景菌含量相对较高的样品(如生鲜禽肉等),杂菌的干扰性相对较大,提高至42℃培养可以在一定程度上减少杂菌的繁殖,提高检出率。
(3)增加了预增菌液(BPW)允许在2-8℃冷藏保存不超过72h再进行选择性增菌,通过验证,此操作对最终检出率没有显著影响,也是考虑到企业现状,如果遇到休班或者其他原因不能当天及时检验等情况,可以暂存在2-8℃冰箱内冷藏待检。
3.分离步骤改动
增加了选择性增菌液(TTB和RVS)允许在2-8℃冷藏保存不超过72h,再转接选择性平板进行分离培养,原因同上。
4.生化鉴定步骤改动
(1)挑取菌落数由原来的选择性平板分别挑取2个菌落更改为总共挑取4个以上的典型菌落,且宜选择来自不同增菌液和不同选择性平板上的菌落,同时也允许先对一个可疑或典型菌落进行鉴定,若不是沙门再对其他可疑菌落进行鉴定。新标准的方法更具有灵活性,可疑根据实际的检验结果来进行选择鉴定,同时也能减少工作量,降低检验成本,节约试剂。
(2)生化鉴定出现A1反应时,增加血清学鉴定后报告结果,出现A3反应补做ONPG后,也要加血清学鉴定后报告结果。表5的生化群和生化反应进行了扩充,新标准列出7个亚种,相比较于原标准,增加了明胶酶、酒石酸盐、半乳糖醛酸、γ-谷胺酰转肽酶,β-葡糖醛酸苷酶、黏液酸、乳糖、O1噬菌体裂解试验。在进行判定上与原标准基本上没有改动,只是增加了项目。
5.血清鉴定:主要在H抗原鉴定上,详细写出了简易平板法、小玻管法和小套管法操作方法。
6.培养基配方改动
(1)TTB:成分没有改变,但基础液体积由原来的1050mL更改为1000mL,灭菌温度由121℃20min更改为加热煮沸灭菌,pH由7.0±0.2更改为7.6±0.2。名称2024版存在一点问题,前后不一致,前半部分内容使用的名称为“四硫磺酸钠煌绿增菌液”,附录名称为“四硫磺酸盐煌绿增菌液”。
(2)新增RVS配方,删除SC。
(3)HE、BS、XLD、TSI等培养基一些成分名称做了规范化更改(如牛肉膏改为了牛肉浸粉,酵母膏改为了酵母浸粉),倾注平板的温度都由50-55℃调整为48±2℃,个别培养基的琼脂量做了固定,总体变化不大,对培养基使用和效果没有影响。
(4)蛋白胨水配方中补加了色氨酸,蛋白胨用量减少至10g,主要是增加的色氨酸可以生成更多的吲哚,有利于阳性结果的观察。
(5)氰化钾试验要求在试验管覆盖石蜡,目的是阻止氰化钾挥发失效导致出现假阳性结果。
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