生物学指标检验是营养类原材料最主要和最关键的指标,直接关系培养基的质量好坏。原材料生产厂家和培养基生产厂家都应重点进行检测。主要检测的指标有可发酵糖试验、H2S试验﹑靛基质(吲哚)试验、V-Р试验﹑生长试验﹑色素试验﹑菌落总数检测和耐热芽孢杆菌总数等。
2．H2S试验
称取样品1.0g、氯化钠0.5g、蒸馏水或去离子水100mL，配制成溶液，调节其pH值至7.2～7.6,分装于试管中,每管6.0mL,121℃高压灭菌15min后,接种鼠伤寒沙门氏菌的18h～24h的新鲜培养物,将醋酸铅(PbAc)试纸插人试管中,试纸下端距离液面2cm～3cm,盖好试管盖30℃～35℃培养24h~48h,观察结果。阳性结果:醋酸铅试纸条变黑，且黑色域不得小于0.5cm。阴性结果:醋酸铅试纸条不变黑或黑色域小于0.5cm。
3．靛基质(吲哚)试验
称取样品2.0g、氯化钠0.5g,蒸馏水或去离子水100mL,配制成溶液，调节其pH值至7.2～7.6,分装于试管中,每管6.0mL,121℃高压灭菌15min高压灭菌后,分别接种大肠埃希氏菌、鼠伤寒沙门氏菌的18h～24h 的新鲜培养物,35℃±2℃培养18h～24h。观察结果时每管加入2～4滴靛基质试剂。10s内液面上出现玫瑰红色环者为阳性,出现黄色者为阴性。大肠埃希氏菌应为阳性,鼠伤寒沙门氏菌呈阴性。
4．V-P试验
称取样品0.7g、葡萄糖0.5g、氯化钠0.5g,加100mL的蒸馏水或去离子水配制成溶液,调节其pH值7.2～7.4,以每管6.0mL分装115℃高压灭菌15min后,分别接种产气肠杆菌,大肠埃希氏菌的18h~24h新鲜培养物,35℃±2℃培养18h～24h。观察结果时，除去试管帽,依次加入VP试剂甲、乙液，甲液6滴,乙液2滴,混合均匀,放置36℃培养箱孵育30min,溶液变红色为阳性,不变色为阴性。产气肠杆菌呈阳性反应,大肠埃希氏菌呈阴性反应。
5．色素试验
称取样品2.0g、氯化钠0.5、琼脂1.2g,加入100mL的蒸馏水或去离子水中,加热完全溶解,调节pH值7.2～7.4,121℃高压灭菌15min高压灭菌后,待温度降到50℃左右时倾注平板﹐充分凝固后﹐四区划线接种金黄色葡萄球菌和铜绿假单胞杆菌的新鲜培养物,35℃±2℃培养18h~24h,观察结果,应生长良好,金黄色葡萄球菌有黄色色素生成﹐铜绿假单胞菌有绿色色素生成。
6．生长试验
(1)质控菌株2)操作方法:制备好的固体培养基，用记号笔成90°交叉划线分成四份，依次滴加10mL，浓度为104CFU/mL、105CFU/ml、106CFU/ml、107CFU/ml的质控菌株菌液(见图4-5-1),轻轻摇动,待菌液吸干后倒置于35℃±2℃培养18h～24h。同时用合格品做对照品,样品应与对照品结果基本一样或优于对照品时，判为合格。
7．菌落总是检测
称取25g样品溶解于225mL无菌蒸馏水或去离子水后，制成10倍系列稀释液，选取两三个适宜稀释度，吸取1mL样品液涂布于平板计数琼脂(PCA)平板上,36℃±1℃培养48h±2h计数结果,需做2个重复。
8．耐热芽孢杆菌检测
称取25g样品溶解于225mL无菌蒸馏水或去离子水后,制成10倍系列稀释液，选取两三个适宜稀释度，吸取lmL样品液涂布于葡萄糖胰蛋白豚琼脂平板上,55℃±1℃培养48h±2h计数结果﹐需做⒉个重复。主要营养类原材料的生物学检验指标见表4-5-2。
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原材料 名称 |
可发酵 糖试验 |
H2S 试验 |
靛基质 (吲哚)试验 |
V-P 试验 |
色素 试验 |
生长 试验 |
菌落总数 /(CFU/g) |
耐热芽孢杆菌 总数/(CFU/g) |
|
肉蛋白胨 |
- |
+ |
+/- |
+/- |
+/+ |
合格 |
＜5000 |
0 |
|
大豆蛋白胨 |
- |
+ |
+/- |
+/- |
+/+ |
合格 |
＜5000 |
0 |
|
酪蛋白胨 |
- |
+ |
+/- |
+/- |
+/+ |
合格 |
＜5000 |
0 |
|
明胶蛋白胨 |
- |
+ |
+/- |
+/- |
+/+ |
合格 |
＜5000 |
0 |
|
酵母浸出粉 |
- |
// |
// |
// |
// |
合格 |
＜5000 |
＜10 |
|
牛肉浸出粉 |
- |
// |
// |
// |
+/+ |
合格 |
＜5000 |
＜10 |
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注:“-”表示阴性反应，“＋”表示阳性反应,“//”表示不检测此项指标，靛基质试验中:大肠埃希氏菌与鼠伤寒沙门氏菌用“/”分开表示，V-P试验中:产气肠杆菌与大肠埃希氏菌用“/”分开表示，色素试验中:金黄色葡萄球菌与铜绿假单胞菌用“/”分开表示。 |
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