一、卵黄的作用
许多培养基制备时,都会用到卵黄。一方面,卵黄具有丰富的营养,可以支持一些营养苛求型细菌的生长,如培养奈瑟氏菌的卵黄双抗培养基、培养分枝杆菌的罗氏培养基等,添加的卵黄做为营养补充剂,可以促进细菌的快速生长;另一方面,卵黄中含有丰富的卵磷脂和脂肪可以检测细菌的生化特性,能够分解脂肪和卵磷脂的细菌在含卵黄的培养基上菌落周围能够产生晕圈。
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MYP平板(蜡样芽孢杆菌) |
卵黄平板(产气荚膜梭菌) |
二、卵黄的制备
通常情况下,鸡蛋中的蛋黄是无菌的,使用消毒剂对鸡蛋表面擦拭或浸泡消毒以后,用无菌镊子敲碎鸡蛋,轻轻摇晃尽可能倒掉蛋清,留下蛋黄倒入含有无菌玻璃珠的锥形瓶中,加入等量体积的生理盐水混合均匀(通常一个蛋黄约15-20g),即为50%的卵黄乳液。
注:宜采用新鲜鸡蛋,有些鸡蛋的蛋黄存在污染的可能性,制备好的卵黄乳液宜当天使用。若蛋黄出现散黄、异味等现象,则不应使用。
三、卵黄的保存
为尽可能延长卵黄的保存时间,应将制备好的卵黄乳液置于2-8℃冰箱中冷藏保存。对于自行制备的卵黄乳液在进行长期保存时,临用前应对无菌性进行检查(可取少量卵黄乳液涂布至TSA平板培养1-2天),若出现污染则不能使用。
注:自制的卵黄污染风险相对较高,一般建议使用商品化生产的无菌卵黄乳液,可以更久的储存。
四、卵黄的使用
卵黄受热过度会变性凝固,因此卵黄通常要在培养基灭菌后冷却至50℃左右时加入(液体培养基可以冷却至更低的温度时添加),加入卵黄后的培养基不可继续保温或者凝固后复融使用,大多数培养基中卵黄的添加量为5%-15%。
注:由于卵黄通常在2-8℃储存,在往培养基中添加之前需平衡至室温(或温水浴至40℃),防止培养基接触过冷的卵黄出现凝块。培养基的温度也不能过高,防止加入的卵黄出现变性。还要注意卵黄经过冷藏保存后,可能会有分层现象,这时需要手动摇匀或使用振荡器混匀后再使用。加入卵黄后的培养基应轻轻摇匀,避免产生过多气泡,影响使用效果。
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