猪肺炎支原体疫苗培养基的原理和使用方法

一、用途及试验原理

  用途：用于猪肺炎支原体的培养。

  原理：蛋白胨，牛心浸粉，酵母浸粉提供氮源，维生素，氨基酸和生长因子。

二、培养基配方（g/L）

三、试验方法

  1、称取本品17.6g，加热溶解于800mL纯化水中，121℃高压灭菌15分钟，冷却至室温，无菌操作加入200 mL猪血清，混匀，分装，备用。

  2、制备质控菌株，接种至培养基中，做10倍系列稀释，稀释至10^-9，并做空白对照。

  3、放置于36℃±1℃恒温培养箱中，微需氧培养7-14天。

四、试验注意事项

  1、若使用非一次性试管等容器进行试验，容器使用前应使用蒸馏水冲洗干净，确保无洗涤液等残留物，以免增加试验的不确定性或污染。

  2、灭菌结束后，试管口会有水珠，在进行梯度稀释时，水珠很容易与空气中的细菌接触以致污染，因此，试管口应灼烧至干燥，胶塞也需过火，振荡操作后，若培养基接触到胶塞，还需再次进行灼烧操作。

  3、调节pH时，使用的酸碱试剂需是无菌的。

  4、支原体培养前应使用封口膜封口，可提供微需氧环境以及降低污染的风险。

五、质控结果

  接种以下质控菌株，放置于36℃±1℃恒温培养箱中，需氧培养7-14天。猪肺炎支原体培养至11天的试验结果如图1所示。

图1 猪肺炎支原体疫苗培养基培养猪肺炎支原体11天时的试验结果

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