选择性增菌培养基的出厂检验及验收方法

一、选择性增菌培养基的介绍

 在分离特定的目标菌时，若样品中存在较多的干扰菌，直接分离会比较困难，而选择性增菌培养基的主要作用是尽可能抑制杂菌的生长，让目标菌得到较多的增殖，逐渐称为优势群体，则可以很好的提高检出率。

二、培养基的出厂检验

   待测培养基制备：按照说明书进行配制，分装至试管，每管10mL。

1.混合菌的接种

菌悬液制备：将质控菌株接种至非选择性肉汤或平板中进行活化培养，使用生理盐水或磷酸盐缓冲液进行十倍系列稀释至适宜梯度。

接种及培养：向待测试管中接种10-100CFU的目标菌，以及1000-5000CFU的非目标菌，接种总体积为1mL，同时分别使用TSA对目标菌和非目标菌进行接种量的计数，置于标准中规定的条件下进行培养。

例：检验7.5%氯化钠肉汤，需在试管中接种10-100CFU的金黄色葡萄球菌和1000-5000CFU的大肠埃希氏菌，可将金黄色葡萄球菌制成约10-100CFU/mL的菌悬液，大肠埃希氏菌制成约10000-50000CFU/mL的菌悬液，吸取0.9mL金黄色葡萄球菌菌液及0.1mL大肠埃希氏菌菌液至7.5%氯化钠肉汤中，金黄色葡萄球菌菌液可直接使用TSA倾注计数接种量，大肠埃希氏菌菌液需进行百倍稀释后，吸取1mL菌液用TSA倾注计数接种量。将接种后的培养基置36±1℃培养18-24h。

2.非目标菌的接种

菌悬液制备：将质控菌株接种至非选择性肉汤或平板中进行活化培养，使用生理盐水或磷酸盐缓冲液进行十倍系列稀释至含菌量为1000-5000CFU/mL。

接种及培养：吸取1mL制备好的菌悬液加入至待测培养基试管中，接种2支平行，置于标准中规定的条件下进行培养。

3.混合菌培养液的接种

用10μL接种环取1环经培养后的混合菌培养液，划线接种到特定的选择性平板上，同时每管接种一个平板。按标准方法中规定的培养时间和温度进行培养。

例：用10μL接种环挑取1环培养后的7.5%氯化钠肉汤混合菌测试管的培养液，划线到Baird-parker琼脂平板上，每支试管划1个平板，36±1℃培养24-48h

4.非目标菌培养液的接种

吸取10μL经培养后的非目标菌培养液，涂布或倾注法接种到非选择性平板（如TSA）上。同时每管接种一个平板，并按标准规定的培养条件培养平板。

5.结果判定

混合菌接种选择性平板上的典型特征菌落数应＞10CFU，非目标菌在非选择性平板上菌落数应＜100CFU。

解析：选择性增菌培养基通常有较强的抑菌性，除了对非目标菌有抑制性以外，有时对目标菌的生长也具有一定的抑制性，因此在接种10-100CFU的目标菌培养结束后，经常会观察不到明显的生长浑浊现象，因此需要通过转接选择性平板观察菌落数来确定目标菌在选择性增菌培养基中有没有增殖。非目标菌也是如此，通过转接计数平板上的菌落数来判断非目标菌在选择性增菌培养基中有无明显的增殖。

三、培养基的验收方法

将质控菌株接种至非选择性肉汤培养基中过夜培养，稀释至10^-3，也可采用其他方法制备含菌量10⁵-10⁷CFU/mL的菌悬液，使用1μL接种环挑取1环菌液，接种至待测培养基中，置于标准规定的条件进行培养。

结果判定：接种目标菌的试管浊度值应达到2，接种非目标菌的试管浊度应为0或1。

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