弧菌的活化及保存

一、弧菌简介

  弧菌（Vibrio）是常存在于河水、湖水、海水等环境中的一类革兰氏阴性弯杆菌，一些水产品中经常会带有致病性的弧菌，如霍乱弧菌、副溶血性弧菌、创伤弧菌等，可通过伤口或食道感染，某些血清型的菌株有强烈的毒性（如O1群霍乱弧菌），感染后造成严重的症状，甚至死亡。不同的弧菌具有不同的嗜盐性，大部分弧菌在含3%左右浓度氯化钠的培养基中生长旺盛，因此常使用2216E培养基或3%氯化钠TSA培养弧菌。

二、活化方法

  培养基：弧菌的活化常用2216E液体培养、2216E琼脂或3%氯化钠胰蛋白胨大豆琼脂。也可以使用其他非选择培养基补充氯化钠至3%左右使用，对于淡水类弧菌，也可以使用TSB、BHI等培养基活化。

  操作方法：若菌种为冻干粉形式，按照说明书溶解后，可直接涂布或划线至2216E或3%氯化钠TSA平板上，也可加入至2216E液体培养基中；若菌种为甘油冻存管形式，从冰箱中取出速融后，涂布或划线至2216E或3%氯化钠TSA平板上，或加入至2216E液体培养基中；若菌种为瓷珠形式，挑取瓷珠可转入2216E液体培养基或平板或3%氯化钠TSA平板上，30-37℃培养1-2天。

  注：部分海洋弧菌具有一定嗜冷的特性，如哈氏弧菌，在30-37℃虽然可以生长，但不能表现发光特性，需在25℃以下进行培养2-3天，可观察到明显的发光现象。

三、实验室常用保存方法

1.斜面保存法

  将3%氯化钠TSA或2216E琼脂培养基制成斜面管，接种弧菌后培养至菌落生长良好，置于室温可保存1-2周。

注：一些弧菌在2-8℃会出现自溶现象，因此一般不在2-8℃保存。

2.甘油/瓷珠冷冻保存法

  可挑取培养好的弧菌至弧菌专用菌种液体/瓷珠菌种保存管（通常含有3%的氯化钠）中制成约10⁹CFU/mL的菌液（瓷珠保存法需摇匀后弃菌液保留瓷珠），置于冰箱或液氮罐中冷冻保存，在-70℃以下可保存两年以上。

  注：一些弧菌生命力相对较弱，在-20℃容易死亡，因此建议进行低温冷冻保藏时，尽可能在-70℃以下保存。

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