金黄色葡萄球菌检验方法-化妆品安全技术规范(2022年版)

1.范围

  本规范规定了化妆品中金黄金色葡萄球菌的检验方法。

  本规范适用于化妆品中金黄色葡萄球菌的检验。

2.定义

  2.1 金黄色葡萄球菌 Staphylococcus aureus

  为革兰氏阳性球菌，呈葡萄状排列，无芽胞，无荚膜，能分解甘露醇，血浆凝固酶阳性。

3.仪器和设备

  3.1 显微镜。

  3.2 恒温培养箱:36℃±1℃。

  3.3 离心机。

  3.4 灭菌刻度吸管:10mL、 1mL。

  3.5 试管:18 mm×150mm。

  3.6 载玻片。

  3.7 酒精灯。

  3.8 三角瓶:250mL。

  3.9 高压灭菌器。

  3.10 恒温水浴箱。

4.培养基和试剂

  4.1 SCDLP 液体培养基

  见总则中 3.2。

  4.2 营养肉汤

  4.3 7.5%氯化钠肉汤

  4.4 Baird Parker平板

  制法:将各成分加到蒸馏水中，加热煮沸完全溶解，冷至25℃±1℃，调节pH。分装每瓶95mL，121℃高压灭菌15min。临用时加热溶化琼脂，冷至50℃，每95mL加入预热至50℃左右的卵黄亚碲酸钾增菌剂5mL，摇匀后倾注平板。培养基应是致密不透明的。使用前在冰箱贮存不得超过48h±2h。

  4.5 血琼脂平板

  4.6 甘露醇发酵培养基

  4.7 灭菌液体石蜡

  见总则中3.3。

  4.8 兔（人）血浆制备

  取3.8%柠檬酸钠溶液，121℃高压灭菌30min，1份加兔（人）全血4份，混匀静置;2000rpm～3000rpm离心3min~5min。血球下沉，取上面血浆。

5.操作步骤

  5.1 增菌:取1:10稀释的检液10mL接种到90mL SCDLP液体培养基中，置36℃±1℃培养箱，培养24h±2h。

  注:如无此培养基也可用7.5%氯化钠肉汤。

  5.2 分离:自上述增菌培养液中，取1～2接种环，划线接种到Baird Parker平板上，如无此培养基也可划线接种到血琼脂平板上，置.36℃±1℃培养48h±2h。在血琼脂平板上菌落呈金黄色，圆形，不透明，表面光滑，周围有溶血圈。在Baird Parker平板培养基上为圆形，光滑，凸起，湿润，颜色呈灰色到黑色，边缘为淡色，周围为一混浊带，在其外层有一透明带。用接种针接触菌落似有奶油树胶的软度。偶然会遇到非脂肪溶解的类似菌落，但无混浊带及透明带。挑取单个菌落分纯在血琼脂平板上，置36℃±1℃培养24h±2h。

  5.3 染色镜检:挑取血琼脂平板上分纯后的菌落，涂片，进行革兰氏染色，镜检。金黄色葡萄球菌为革兰氏阳性菌，排列成葡萄状，无芽胞，无荚膜，致病性葡萄球菌，菌体较小，直径约为0.5um~1um。

  5.4 甘露醇发酵试验:取血琼脂平板上分纯后的菌落接种到甘露醇发酵培养基中，在培养基液面上加入高度为2mm~3mm 的灭菌液体石蜡，置36℃±1℃培养24h±2h，金黄色葡萄球菌应能发酵甘露醇产酸。

  5.5 血浆凝固酶试验:吸取1:4新鲜血浆0.5mL，置于灭菌小试管中，加入待检菌24h±2h营养肉汤培养物0.5mL，混匀，置36℃±1℃恒温箱或恒温水浴中，每半小时观察一次，6h之内如呈现凝块即为阳性。同时将已知血浆凝固酶阳性和阴性菌株的营养肉汤培养物及营养肉汤培养基各0.5mL，分别加入无菌1:4血浆0.5mL，混匀，作为对照。也可使用商品化试剂，按照说明书操作，进行血浆凝固酶试验。

6.检验结果报告

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