抗人免疫球蛋白荧光抗体

【原理】

  人类感染各种致病微生物后,会针对微生物的抗原成分产生相应的抗体,一般在感染的早期出现IgM类抗体,随后出现IgG和/或IgA类抗体。有些感染,如梅毒,即使治愈后IgG类抗体也一直维持阳性。检测人血清中抗微生物抗体是微生物感染实验室诊断的重要手段。急性感染的早期快速诊断,可以检测IgM类抗体,随后可以检测IgG类和/或IgA类抗体;慢性感染可以检测IgM和IgG类抗体;恢复期一般可检测IgG类抗体。在感染过程中,可以根据抗体效价的变化确定感染的诊断或监测抗感染治疗的效果。

  检测人血清中抗体的方法很多,免疫荧光法则是现代抗体检测技术中最重要的技术之一,尤其在快速检测技术中占有突出的地位。其基本原理是以荧光素标记各类抗人免疫球蛋白的抗体,检测时以各种形式的微生物体或其抗原成分固定于玻片上,然后加入待测血清与之反应,人血清中的对应抗体将结合于微生物体或其抗原成分上,随后即可用荧光素标记的抗人免疫球蛋白抗体将其在荧光显微镜下或一定的荧光光度计下显出,并且可以达到半定量或定量的水平。

【制法】

  (1)从正常健康青壮年人血清中提取γ球蛋白或分别提取IgG、IgM和IgA免疫球蛋白;

  (2)以上述4种球蛋白分别免疫家兔(兔抗人)或羊(羊抗人)或其他合适动物,制备抗人Y球蛋白、抗人IgG(或γ链)、抗人IgM(或μ链)和抗人IgA(或α链)的抗血清;

  (3)从上述抗血清中分别提取免疫球蛋白G(IgG)。以荧光素分别标记上述IgG,分离纯化鉴定后即得4种抗人免疫球蛋白荧光抗体。根据需要,可以用两种荧光素(FITC和TMRITC)分别标记不同的抗人免疫球蛋白，如以 FITC标记抗人IgG,以TMRITC标记抗人IgM,这两种不同荧光颜色的标记抗体可以混合作双标抗体染色用。

【用途】

  在微生物学中,主要以间接荧光抗体染色用以检测人类抗微生物抗体,其作用为:

  (1)急性感染的早期快速诊断。

  (2)慢性感染的血清学辅助诊断。

  (3)疗效监测。

  (4)观察感染过程中抗体效价动力学变化。

  (5)疫苗免疫效果的监测。

  (6)人群对某种传染病的免疫水平监测。

【注意事项】

  抗人免疫球蛋白荧光抗体是临床检验上最常用的荧光抗体,以全IgG、IgM或IgA为免疫原制备的抗体,各类Ig间轻链有交叉反应,故最好以γ链、μ链为免疫原制备抗血清,否则应将抗轻链抗体吸收去除。

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