桥坝式选择培养基

【原理】

  本培养基为一复合培养基。亚碲酸钾胰蛋白䏡基础琼脂平皿中含0.05％的亚啼酸钾以抑制革兰氏阴性细菌的生长；硫氰酸钾液体及半固体培养基中含有0.375％的硫氰酸钾，有抑制革兰阴性细菌及部分革兰氏阳性细菌的作用。滤纸条桥与半固体坝可让有动力的单核球增多性李斯特氏菌(Listerid monocytogenes)通过而阻止无动力的杂菌通过，因此本培养基具有高度选择性。单核球增多性李斯特氏菌在本琼脂平皿培养基上生长成黑色小菌落。

【成分】

  1.亚啼酸钾胰蛋白䏡基础琼脂平皿培养基（每升蒸馏水中的成分）

  2.硫氰酸钾液体及半固体培养基（每升蒸馏水中的成分）

  1.亚啼酸钾胰蛋白䏡基础琼脂平板：

  将上述成分（除亚啼酸钾外）悬浮于1000ml蒸馏水内，加热溶解，调整至pH7.2,121℃灭菌15分钟，冷至50℃左右，加入无菌5％亚啼酸钾水溶液10ml，混匀（最终浓度为0.05%）后，倾注平皿备用。

  2.硫氰酸钾液体及半固体培养基：

  悬浮上述各成分（除琼脂粉外)于1000蒸馏水内，加温使完全溶解，调整至pH7.2.此即为硫氰酸钾液体培养基。在100ml液体培养基中加入0.35g的琼脂粉，加温溶解后即为硫氰酸钾半固体培养基。两者均以高压灭菌（121℃,15分钟）取出后，半固体培养基置50℃水浴中备用或临用前在水浴中加温溶解。

  3.桥坝式选择培养基：

  取制好的亚啼酸钾琼脂平皿培养基，在中间开一条宽为4~5mm的直沟，注意在两端各留0.5cm距离的琼脂不切去，这样可保持中沟宽度的稳定。再在无菌操作下于中沟内滴加在50℃水浴保温的硫氰酸钾半固体培养基至满，以等距离间隔并与中沟垂直放入预先干热灭菌的1X4(cm）滤纸条3张跨接于沟的两端作为桥，再将灭菌铝片框，即取宽度为6mm，长的200mm的铝片条围成一中空长立方形框架，其长为90mm（根据培养血的直径而定），宽4mm，高6mm，接头处扣，然后将框的上下两面在细油石平面上磨平，洗净，灭菌后备用，置于中沟之上并轻压之。再在框内加入溶解的硫氰酸钾半固体培养基使与框边水平，待凝固后轻轻取出铝片框，两端与平皿相接处再加溶解的半固体培养基连接并加至坝的同样高度，此坝把琼脂平板培养基分隔成两半，左边 A 为病料悬液接种端，右边 B 为分离端。

【用途】

  分离单核球增多性李斯特氏菌用。

【注意事项】

  在制备亚啼酸钾琼脂平板时，亚啼酸钾不能直接加入培养基中一起灭菌，否则因高热而使整个培养基变黑。采用亚啼酸钾溶液单独分开灭菌或过滤除菌后待培养基冷至50℃左右再加入到培养基中，可避免培养基变黑。

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