【原理】
人尿含有约2%尿素、适量的NaCI及缓冲盐等,又有少许有机物及某些微量元素, pH微酸性至中性,本培养基适于一般细菌生长,如再加少量葡萄糖及蛋白胨提供营养的碳源及氮源,则可促进细菌加快繁殖。其中产生尿素酶的细菌,即迅速分解尿中的尿素产生氨,使附加的酚红指示剂由淡黄色(pH6.8)变呈鲜红色(pH>8.1),可在10分钟至4小时内看出结果,比一般尿素培养基反应快。虽然许多种细菌也分解葡萄糖产酸,但量少,不影响结果,且使阴性反应更明显。又因尿液缓冲力弱, pH变色敏感。
【成分】
新鲜男人尿(中段尿)
100ml
蛋白胨
0.1g
葡萄糖
0.1g
0.2%酚红水溶液
0.5~1ml
【制法】
(1)先用酒精擦拭消毒男人尿道口周围,最先排弃第1段的尿,留取排出的中段尿盛于无菌容器内,然后排弃剩余的尿;
(2)以无菌量筒或大吸管取90ml新鲜中段尿盛于瓶内,称蛋白胨及葡萄糖各0.1g溶于10ml水中,煮沸灭菌5分钟后,加于尿液内,再加0.2%酚红水溶液0.5~1ml ,分装于无菌试管内约3ml,即可使用。如尿液混浊有沉淀,可放在50℃的温水浴中加热溶解片刻即清澄。
【用途】
用于鉴定能分解尿素的细菌(尿素酶阳性),以与其它菌类区别。分解尿素的细菌计有下列各种。
主要是大多数变形杆菌,各种布鲁氏菌,未分类的第Ⅳ组产碱杆菌,不产色杆菌属(Achromobacter)中生物1型及2型菌,假单胞样杆菌(Pseudomonaslike bacteria)中若干组、型细菌,变黑欧文氏菌(Erwinia nigrifluens),尿素巴斯德杆菌(Pasteurellaurease),支气管败血鲍德氏杆菌(Bordetella bronchiseptica),肺炎克雷伯杆菌(kledsiella pneumoniae)苯基丙酮摩纳克斯氏菌(Moraxella phenylpyruvica)等。
【注意事项】
1、尿液培基快速检测时应将细菌较多量接种上述液体人尿培养基中,在37℃孵箱或水浴箱中孵育,隔10、30、60分种及小时各观察1次,如培养基不变,呈红色,则继续孵育12~24小时后再观察。培养基由橘黄色行呈鲜红色者,表明尿素已被细菌产生的尿素酶分解,产生碱(PH>8.1)。注意初次接种菌量不宜太少,且需取纯菌接种。
2、用人尿琼脂基检测时，取高压蒸汽灭菌过的15%~20%琼脂加热溶化,待冷至50℃溶融时,以10ml加入于上记人尿液培养基90ml中(注意须先将人尿液培养基放在水浴中临时加温至50℃,以防加入琼脂培养基时遇冷立即凝固),混匀后,趁温热分注于无菌试管内,每管3~5ml,斜置于台上,待凝固成有2cm底层和3cm斜面,使用时只接种细菌于斜面上,不穿刺接种于底层,37℃培养4~6小时,如为快速分解尿素的细菌,则在斜面上产生大量的碱性反应,并渗透入全部底层中,故呈鲜红色,若是缓慢分解尿素的细菌,则先在斜面呈红色,需培养数日后始见底层逐渐全呈红色;不分解尿素的细菌,始终不产碱变色。
3、对于营养要求较高的细菌,需在上述人尿液培养基中加酵母膏至0.3%~0.5%(先配成10%浸液灭菌后加入),加无菌未灭能的牛血清或马血清1%。有时还可加氯高铁血红素(hemin)或羟高铁血红素(hematin)0.5mg/100ml培基。
4、对于检测厌氧菌尿素酶反应,可在人尿液体培养基或人尿琼脂固体培养基中添加巯基乙酸钠0.1%~0.2%(水溶,煮沸灭菌后加入)。接种细菌后在37℃中培养。
(第二军医大学 叶天星供稿)
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