一、试验用途及原理：
此试验常用于绿脓杆菌和双歧杆菌的生化鉴定。
蛋白胨和酵母粉提供基本营养需求；磷酸氢二钾调节培养基的pH；葡萄糖酸钾可被某些细菌分解成还原性的葡萄糖，然后与班氏试剂发生反应生成砖红色沉淀。
二、培养基配方（g/L)
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蛋白胨 |
1.5 |
|
酵母粉 |
1.0 |
|
磷酸氢二钾 |
1.0 |
|
葡萄糖酸钾 |
40.0 |
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pH值7.0±0.2 25℃ |
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班氏试剂配方（g/L)
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柠檬酸钠 |
173.0 |
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碳酸钠 |
100.0 |
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五水硫酸铜 |
17.3 |
1.挑取待测菌的单菌落至无菌生理盐水中，制备约109CFU/mL浓度菌悬液。
2.吸取100微升菌悬液加入到葡萄糖酸盐生化管中，并放置于36±1℃，需氧条件下培养24±2小时（若培养双歧杆菌，需厌氧培养）。
3.培养结束后按1:1的比例加入班氏试剂，并将生化管置于沸水浴中水浴1-10分钟，冷却后观察结果。如出现砖红色沉淀，则为阳性；若颜色依为浅蓝色，则为阴性。
三、实验结果：
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质控菌株 |
菌株编号 |
接种量 （CFU) |
参比或计 数培养基 |
方法 |
生长 情况 |
其他特征 |
|
大肠埃希氏菌 |
ATCC25922 |
＞5000 |
/ |
定性 |
+++ |
(+)砖红色(滴加班氏试剂) |
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铜绿假单胞菌 |
ATCC27853 |
＞5000 |
/ |
定性 |
+++ |
(+)砖红色(滴加班氏试剂) |
|
铜绿假单胞菌 |
ATCC9027 |
＞5000 |
/ |
定性 |
+++ |
(-)浅蓝色(滴加班氏试剂) |
a：大肠埃希氏菌ATCC25922；b：铜绿假单胞菌ATCC27853；c：铜绿假单胞菌ATCC9027；d：空白对照
图1 葡萄糖酸盐试验
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