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一、培养基用途
mCPC培养基用于致病性弧菌的选择性分离。
二、检验原理
蛋白胨、牛肉粉作为培养基中的基础营养物质，提供细菌生长所需的碳氮源、维生素和其他的生长因子；氯化钠维持培养基体系的渗透压平衡；多粘菌素B和多粘菌素E能抑制副溶血性弧菌和溶藻弧菌等非目标菌的生长；纤维二糖为可发酵的糖类；溴百里酚兰和甲酚红为pH指示剂；琼脂是培养基的凝固剂。本培养基一纤维二糖作为鉴别剂，创伤弧菌可发酵纤维二糖产酸显黄色。
三、培养基配方（g/L）
|
蛋白胨 |
10.0 |
| 氯化钠 | 20.0 |
| 琼脂 | 15.0 |
| 甲酚红 | 0.04 |
| 溴百里酚兰 | 0.04 |
| 牛肉粉 | 5.0 |
| pH值7.5-7.7 | 25℃ |
四、试验方法
1.称取本品5.0克，加热煮沸溶解90mL蒸馏水中，冷却到48-55℃时加入10%纤维二糖水溶液10mL和1支mCPC添加剂（多粘菌素E 40000units和多粘菌素B 10000units）混匀，倾入无菌空平皿，无需高压灭菌；
2.制备质控菌液；
3.目标菌（创伤弧菌）：选择合适稀释度的质控菌液100μL，均匀涂布于待测培养基上，每一稀释度接种两个平板；非目标菌（特异性）：使用1μL接种环挑取1环霍乱弧菌菌液，定性划线接种于待测平板；非目标菌（选择性）：分别使用1μL接种环挑取1环副溶血性弧菌、大肠埃希氏菌和金黄色葡萄球菌菌液，在待测平板表面划六条平行线；
4.放置36±1℃需氧培养24-48小时，记录试验结果。
五、试验结果判断
接种以下质控菌株，放置36±1℃需氧培养24-48小时。
|
质控菌株 |
菌株编号 |
接种量(CFU) |
参比或计数培养基 |
方法 |
质控结果 |
其他特征 |
|
副溶血性弧菌 |
ATCC17802 |
/ |
/ |
半定量 |
G≤1 |
抑制 |
|
霍乱弧菌 |
/ |
/ |
/ |
定性 |
/ |
紫色菌落 |
|
创伤弧菌 |
ATCC27562 |
20-200 |
3%NaCl TSA |
定量 |
PR≥0.1 |
圆形扁平，中心不透明， 边缘透明的黄色菌落 |
|
大肠埃希氏菌 |
ATCC25922 |
/ |
/ |
半定量 |
G≤1 |
抑制 |
|
金黄色葡萄球菌 |
ATCC25923 |
/ |
/ |
半定量 |
G≤1 |
抑制 |
mCPC培养基质控结果：
 |
|
 |
|
 |
|
副溶血性弧菌 抑制 |
|
霍乱弧菌 紫色菌落 |
|
金黄色葡萄球菌 抑制 |
 |
|
|
|
 |
|
大肠埃希氏菌 抑制 |
|
|
|
创伤弧菌 圆形扁平，中心不透明，边缘透明的黄色菌落 |
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注：本文属海博生物原创，未经允许不得转载。
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