一、用途
用于大肠杆菌O157：H7菌的选择性分离培养。
二、实验原理
蛋白胨、䏡胨提供氮源、维生素和生长因子；氯化钠维持均衡的渗透压；山梨醇为可发酵的糖类；牛胆盐、结晶紫、亚碲酸钾和头孢克肟抑制革兰氏阳性菌；中性红为pH指示剂；琼脂是培养基的凝固剂。
三、培养基配方（g/L）
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蛋白胨 |
17.0 |
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䏡胨 |
3.0 |
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山梨醇 |
10.0 |
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牛胆盐 |
1.5 |
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氯化钠 |
5.0 |
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中性红 |
0.03 |
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结晶紫 |
0.001 |
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琼脂 |
13.5 |
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pH7.2±0.2 |
25℃ |
四、试验方法
1、称取本品51.5g，加热溶解于1000ml蒸馏水中，分装三角瓶，每瓶200ml，121℃高压灭菌15分钟，冷却至45-50℃左右时，加入一支山梨醇麦康凯琼脂添加剂（含头孢克肟0.01mg，亚碲酸钾0.5mg），混匀，倾入无菌平皿，备用；
2、制备质控菌液；
3、选择合适稀释度的目标菌质控菌液0.1ml，均匀涂布于平板上，每一稀释度接种两个平板；
4、用1μL接种环取非目标菌质控菌液1环，将接种环接触容器边缘3次去除多余液体，在平板表面划六条平行直线，同时接种两个平板；
5、36±1℃倒置培养基培养18-24小时，记录实验结果。
五、结果观察与解释
接种以下质控菌株，在36±1℃需氧培养18-24小时：
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质控菌株 |
菌株编号 |
接种量(CFU) |
参比或计数培养基 |
方法 |
质控评定标准 |
其他特征 |
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金黄色葡萄球菌 |
ATCC6538 |
/ |
/ |
半定量 |
G≤1 |
/ |
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大肠埃希氏菌O157 |
ATCC35150 |
10-100 |
TSA |
定量 |
PR≥0.5 |
无色菌落，褐色中心 |
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伤寒沙门氏菌 |
ATCC14028 |
/ |
/ |
定性 |
- |
粉红色菌落 |
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大肠埃希氏菌 |
ATCC25922 |
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定性 |
- |
粉红色菌落，周围有胆盐沉淀 |
山梨醇麦康凯琼脂质控结果：
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大肠埃希氏菌O157 无色菌落，褐色中心 |
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大肠埃希氏菌 粉红色菌落，周围有胆盐沉淀 |
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伤寒沙门氏菌 粉红色菌落 |
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金黄色葡萄球菌 抑制 |
六、注意事项
本培养基仅为细菌鉴定的一部分，需做其他补充试验。
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