1.培养基
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肉汁胨培养基 |
1000ml |
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KNO3 |
1g |
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pH 7.0-7.6 |
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每管分装4-5 ml, 121℃蒸气灭菌15-20 min。
2.试剂
（1）格里斯氏(Griess）试剂
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A液 |
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对氨基苯磺酸 |
0.5g |
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稀醋酸（10%左右） |
150ml |
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B液 |
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α-萘胺 |
0.1g |
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蒸馏水 |
20ml |
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稀醋酸（10%左右） |
150ml |
（2）二苯胺试剂：二苯胺0.5g溶于100 ml浓硫酸中，用20 ml蒸馏水稀释。
3.接种
将测定菌接种于硝酸盐液体培养基中，置适温培养1,3,5天。每株菌作二个重复，另留两管不接种作对照。
4.操作
取二支干净的空试管或在比色瓷盘小窝中倒入少许培养l,3,5天的培养液，再各加一滴A液和B液，在对照管中同样加入A液，B液各一滴。
5.结果观察
当培养液中滴入A,B液后，溶液如变为粉红色、玫瑰红色、橙色、棕色等表示亚硝酸盐存在，为硝酸盐还原阳性。如无红色出现，则可加一、二滴二苯胺试剂，此时如呈蓝色反应，则表示培养液中仍有硝酸盐，又无亚硝酸盐反应，表示无硝酸盐还原作用；如不呈蓝色反应，表示硝酸盐和形成的亚硝酸盐都已还原成其他物质，故仍应按硝酸盐还原阳性处理。
6.注意事项
（1）还原硝酸盐反应是在较为厌氧条件下进行的，虽不必用矿油封液面，但分装试管时液层不宜太薄，对生长缓慢的细菌尤应注意。
（2）对不同种的细菌来说，亚硝酸盐可以是硝酸盐还原的最终产物，也可以是整个 还原过程的中间产生，另一方面，有的种还原极为迅速，有的种还原缓慢因而第一次检查这一项目时要及时(18-24 h)，并且对阴性反应的菌株应连续观察。并且对千未呈现亚硝酸盐反应的测定应检查是否仍有硝酸盐（二苯胺测定），然后才能判断有无硝酸盐的还原反应。
本文节选自《常见细菌系统鉴定手册》第十四章。
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