一、菌落形态
1.平板制作将15～20 ml融化的营养琼脂培养基冷却至50℃左右，按无菌操作倒人直径9 cm的培养皿内。如有冷凝水，倒置于30～37℃温箱内，使之干燥以便于单菌落的出现。
2.单菌落平板（划线法）一点菌苔或一环细菌悬液，在上述无冷凝水的平板一侧边缘处，反复涂抹在直径约为1 cm大小的面积上；烧灼接种环，冷却后，从上述涂菌处划出7～8条直线，前3～4条线的从涂菌处划出，后3～4条直线可不通过涂菌处，划线时接种环与平板表面成30°～40°角，轻轻接触，不要使接种环划破表面；如上述烧灼、划线操作再重复数次，以划满整个平板为宜；倒置平板，于最适温度培养1～2天，出现单菌落。
3.菌落形态观察 形状和大小、边缘、表面、隆起形状，透明度、菌落及培养基的颜色等。
二、生长温度和耐热性
最高、最适、最低和耐受温度能力的特征常常是某些细菌鉴定的特征之一，常用的测定温度(℃)有4,20,30,37,41,45和65。
以液体培养物(24h培养物）一小环转入澄清营养肉汁或合适的液体培养基，置不同温度培养。37℃以上的测定应置水浴中，需3次移种生长者才能确认。
耐热性意味着细胞经受高温还能存活，主要用于链球菌的鉴定。在1m1合适的肉汤或脱脂牛奶中接种1滴24小时的培养物，于60℃水浴30 min,然后于35～37℃培养48 h,生长者则表明存活，粪肠球菌(Enterococcous f aecalis)为该测定的阳性对照。
三、氧和二氧化碳的需要
氧和二氧化碳的需要，常以对氧要求的不同程度来区别细菌，例如好氧菌、微好氧菌和厌氧菌以及兼性厌氧。测定方法有两种：
1.需氧性测定将接种的培养物培养于不同条件包括空气、含5% CO2和10% O2厌氧罐中，分别测得需氧性。
2.芽孢菌厌氧性测定
（1）厌氧培养基
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酪素水解物 |
20g |
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NaCl |
5g |
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疏基醋酸钠 |
1g |
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甲醛次硫酸钠 |
1g |
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琼脂 |
15g |
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蒸馏水 |
1000ml |
（2）接种与观察：用一小环（外径1.5mm的接种环）营养肉汤培养物穿刺于上述培养基，培养于30℃，3天和7天分别记载，仅在表面生长者为好氧菌，如沿穿刺线牛长或下部生长者为兼性厌氧菌或厌氧菌。
本文节选自《常见细菌系统鉴定手册》第十三章。
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