芽孢通常可在革兰氏染色片中看到，但在不易清晰观察时，可用特殊的芽孢染色法，使芽孢与菌体分别呈现不同颜色，便于观察。
（一）孔雀绿染色法
（1）将生有芽孢的斜面菌苔按革兰氏染色法涂片后用饱和的孔雀绿(Malachite green)水溶液（约为7.6%）染10min
（2）用自来水冲洗
（3）用0.5％番红液复染30s
（4）水洗，吸干
（5）镜检：芽孢呈绿色，菌体和芽孢囊呈微红色，但应注意菌体中有异染粒时，也可呈现绿色。
(二）石炭酸复红染色法
1.染剂
（1）石炭酸复红液
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碱性复红（Basic Fuchine,一品红） |
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乙醇饱和液（约10%） |
10ml |
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石炭酸水溶液（5%） |
100ml |
两液相混摇匀备用。
（2）酸性乙醇
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乙醇（95%） |
100ml |
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浓酸盐 |
3ml |
（3）吕氏美蓝染液
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美蓝（次甲基蓝、亚甲蓝、甲烯蓝、Methylene blue） |
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乙醇饱和液（约2%） |
30ml |
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KOH水溶液（0.01%） |
100ml |
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KOH 1%溶液1 ml加水99 ml即为0.015的KOH |
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将两液混合后备用，此液陈旧者更好。
2.染色步骤
（1）按常规涂片。
（2）滴加石炭酸复红于涂片上，并于玻片下缓缓加热，使染液冒蒸气但不沸腾，并继续滴加染液，不使涂片上染液蒸干，这样保持5 min。
（3）涂片冷后，倾去染液，用酸性乙醇脱色至无红色染剂洗脱为止。
（4）彻底水洗。
（5）用吕氏美蓝复染2～3 min。
（6）水洗、吸干、镜检。
3.观察结果
镜检时，菌体及孢囊呈蓝色，芽孢呈红色。
本文节选自《常见细菌系统鉴定手册》第十二章。
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