ÖÐÎÄ°æ | English | ¼ÓÈëÊÕ²Ø | ¿Í·þÈÈÏß:400-0532-596
΢ÉúÎï¼¼Êõ×ÊÁÏ
ÎÄÕ¼ìË÷
Ê×Ò³> ΢ÉúÎï֪ʶ-> ΢ÉúÎï¼ì²â·½·¨ºÍ±ê×¼->»ôÂÒ»¡¾ú¼ìÑé±ê×¼²Ù×÷³ÌÐò

»ôÂÒ»¡¾ú¼ìÑé±ê×¼²Ù×÷³ÌÐò



¼Èëʱ¼ä:2020-3-30 15:25:10 À´Ô´£º2020Äê¹ú¼ÒʳƷÎÛȾºÍÓк¦ÒòËØ·çÏÕ¼à²â¹¤×÷ÊÖ²á(Ͼí)-΢ÉúÎï·½·¨SOP

1 ·½·¨À´Ô´

1.1 ½ø³ö¿ÚʳƷÖлôÂÒ»¡¾ú¼ì²â·½·¨(SN/T 1022-2010)

1.2 ÎÀÉú²¿¡¶»ôÂÒ·ÀÖÎÊֲᡷµÚÁù°æ(2013Äê)


2 ÊÊÓ÷¶Î§

±¾³ÌÐò¹æ¶¨ÁËʳƷÖлôÂÒ»¡¾ú£¨Vibrio cholera£©µÄ¼ìÑé·½·¨¡£±¾³ÌÐòÊÊÓÃÓÚʳƷÖлôÂÒ»¡¾úµÄ¼ìÑé¡£

3 É豸ºÍ²ÄÁÏ

³ý΢ÉúÎïʵÑéÊÒ³£¹æÃð¾ú¼°ÅàÑøÉ豸Í⣬ÆäËûÉ豸ºÍ²ÄÁÏÈçÏ£º

3.1 ºãÎÂÅàÑøÏ䣺36¡æ¡À1 ¡æ¡£

3.2 ºãÎÂÅàÑøÏ䣺41.5¡æ¡À1¡æ¡£

3.3 ±ùÏ䣺2¡æ¡«5¡æ¡£

3.4 ºãÎÂˮԡÏ䣺36¡æ¡À1¡æ¡£

3.5 ¾ùÖÊÆ÷»òÎÞ¾úÈ鲧¡£

3.6 Ììƽ£º¸ÐÁ¿0.1 g¡£

3.7 ÎÞ¾úÊԹܣº18 mm¡Á180mm¡¢15mm¡Á100mm¡£

3.8 ÎÞ¾úÎü¹Ü£º1mL£¨¾ß0.01mL¿Ì¶È£©¡¢10mL£¨¾ß0.1mL¿Ì¶È£©»ò΢Á¿ÒÆÒºÆ÷¼°ÎüÍ·¡£

3.9 ÎÞ¾ú׶ÐÎÆ¿£ºÈÝÁ¿250mL¡¢500 mL¡¢1000mL¡£

3.10 ÎÞ¾úÅàÑøÃó£ºÖ±¾¶90mm¡£

3.11 ΢ÉúÎïÉú»¯¼ø¶¨ÏµÍ³¡£

3.12 ÎÞ¾úÊÖÊõ¼ô¡¢Ä÷×Ó¡£


4 ÅàÑø»ùºÍÊÔ¼Á

4.1 ¼îÐÔµ°°×ëËË®£º¼û¸½Â¼AÖÐA.1¡£

4.2 Áò´úÁòËáÑÎ-ÄûÃÊËáÑÎ-µ¨ÑÎ-ÕáÌÇ£¨TCBS£©ÇíÖ¬£º¼û¸½Â¼AÖÐA.2¡£

4.3 4ºÅÇíÖ¬£º¼û¸½Â¼AÖÐA.3¡£

4.4 Çì´óùËØÇíÖ¬£º¼û¸½Â¼AÖÐA.4¡£

4.5 ÉÌÆ·»¯Éú»¯¼ø¶¨ÊÔ¼Á£º¼û¸½Â¼AÖÐA.5¡£


5¼ìÑé³ÌÐò

6. ²Ù×÷²½Öè

6.1 ÑùÆ·´¦Àí

³ÆÈ¡25gÑùÆ··ÅÈëÊ¢ÓÐ225mL¼îÐÔµ°°×ëËË®µÄÎÞ¾ú¾ùÖʱ­ÖУ¬ÒÔ8000r/min¡«10000r/min¾ùÖÊ1min¡«2min£¬»òÖÃÓÚÊ¢ÓÐ225mL¼îÐÔµ°°×ëËË®µÄÎÞ¾ú¾ùÖÊ´üÖУ¬ÓÃÅÄ»÷ʽ¾ùÖÊÆ÷ÅÄ´ò1min¡«2min¡£ÈçÎÞ¾ùÖÊÆ÷£¬Ôò½«ÑùÆ··ÅÈëÎÞ¾úÈ鲧ÖÐÄ¥Ë飬Ȼºó·ÅÔÚ500mLµÄÃð¾úÈÝÆ÷ÄÚ£¬¼Ó225mL¼îÐÔµ°°×ëËË®£¬²¢³ä·ÖÕñµ´¡£

ÈçΪÀ䶳²úÆ·,Ó¦ÔÚ45¡æÒÔϲ»³¬¹ý15 min,»ò2 ¡æ¡«5¡æ²»³¬¹ý18h½â¶³¡£

6.2 Ò»´ÎÔö¾ú

½«ÉÑùÆ·¡¢¸ÉÆ·¡¢ëç×Õ²úÆ·ÓÚ36¡æ¡À1¡æÅàÑø6h¡«8h£¬ÐÂÏÊÑùÆ·41.5¡æ¡À1¡æÅàÑø6h¡«8h£¨ÈçÎÞÃ÷ÏÔµÄϸ¾úÉú³¤ÏÖÏóÔò¼ÌÐøÅàÑø£¬µ«²»Äܳ¬¹ý20 h£©¡£

6.3 ¶þ´ÎÔö¾ú

ͬʱÎüÈ¡ÉÏÊöÒ»´ÎÔö¾úµÄ±í²ãÔö¾úÒº0.2mL£¬¼ÓÈë10mL¼îÐÔµ°°×ëËË®¹ÜÖУ¬36¡æ¡À1¡æÅàÑø6 h¡«8 h¡£

6.4 ·ÖÀë

6.4.1 ÔÚËùÓÐÏÔʾÉú³¤µÄÒ»¡¢¶þ´ÎÔö¾ú¹ÜÖÐÓýÓÖÖ»·Õ´È¡Ò»»·±í²ãÔö¾úÒº£¬·Ö±ðÓÚTCBS£¨»ò¿ÆÂê¼Î»¡¾úÏÔÉ«ÅàÑø»ù£©Æ½°å¡¢4ºÅÇíÖ¬£¨»òÇì´óùËØÇíÖ¬£©Æ½°åÉÏ»®Ïß·ÖÀë¡£ÓÚ36¡æ¡À1¡æÅàÑø18 h¡«24 h¡£

6.4.2 ¸÷ÖÖƽ°åÉÏ»ôÂÒ»¡¾úµÄµäÐ;úÂäÌØÕ÷¼û±í1¡£

±í1 »ôÂÒ»¡¾úÔÚ²»Í¬Ñ¡ÔñÐÔÇí֬ƽ°åÉϵľúÂäÌØÕ÷

Ñ¡ÔñÐÔÇí֬ƽ°å

»ôÂÒ»¡¾ú

TCBS

Ô²ÐΡ¢±ßÔµ°ë͸Ã÷¶øÖÐÑ벻͸Ã÷¡¢±íÃæ¹â»¬µÄ»ÆÉ«¾úÂ䣬ֱ¾¶Ô¼3 mm×óÓÒ¡£

¿ÆÂê¼Î»¡¾úÏÔÉ«ÅàÑø»ù

À¶É«£¬À¶ÂÌÉ«µ½ÂÌÉ«¾úÂä¡£

4ºÅÇíÖ¬ÅàÑø»ù

Ô²ÐΡ¢°ë͸Ã÷¡¢¹â»¬ÊªÈó¡¢»ÒºÚÉ«Ë®µÎÑù¾úÂ䣬ֱ¾¶Ô¼3 mm×óÓÒ¡£

Çì´óùËØÇí֬ƽ°å

ÂÔ´øÇà»ÒÉ«¡¢°ë͸Ã÷¡¢±âƽ¡¢Î¢Â¡Æ𡢹⻬ʪÈó¡£ÈçÑÓ³¤ÅàÑøʱ¼ä»òÊÒηÅÖõ½48h£¬ ¾úÂäÂÔ´ø»ÆÉ«£¬ÖÐÐÄÐγɺÚÉ«½ðÊôíÚ³Áµí¡£


6.4.3 ´¿ÅàÑø

ÿ¸öƽ°åÉϸ÷ÌôÈ¡5¸ö»òÒÔÉÏ¿ÉÒɾúÂ䣨ÉÙÓÚ5¸öÈ«²¿ÌôÈ¡£©£¬½ÓÖÖÓÚÓªÑøÇí֬бÃ棨»òƽ°å£©£¬36¡æ¡À1¡æÅàÑø18h¡«24h¡£

6.5 ³õ²½¼ø¶¨

6.5.1 Ñõ»¯Ã¸ÊÔÑé

ÌôÑ¡´¿ÅàÑøµÄµ¥¸ö¾úÂä½øÐÐÑõ»¯Ã¸ÊÔÑ飬»ôÂÒ»¡¾úΪÑôÐÔ¡£

6.5.2 ճ˿ÊÔÑé

ÌôÑ¡´¿ÅàÑøµÄµ¥¸ö¾úÂä½øÐÐճ˿ÊÔÑ飬»ôÂÒ»¡¾úΪÑôÐÔ¡£

6.5.3 ͿƬ¾µ¼ì

½«¿ÉÒɾúÂäͿƬ£¬½øÐиïÀ¼ÊÏȾɫ£¬¾µ¼ì¹Û²ìÐÎ̬¡£»ôÂÒ»¡¾úΪ¸ïÀ¼ÊÏÒõÐÔ£¬³Ê»¡ÐΡ¢¶ºµã×´µÈ¶àÐÎ̬£¬ÎÞÑ¿°û¡£

6.5.4 ÌôÈ¡´¿ÅàÑøµÄµ¥¸ö¿ÉÒɾúÂ䣬תÖÖÈýÌÇÌúÇí֬бÃæ²¢´©´Ìµ×²ã£¬36¡æ

¡À1¡æÅàÑø24 h¹Û²ì½á¹û¡£»ôÂÒ»¡¾úÔÚÈýÌÇÌúÇíÖ¬Öеķ´Ó¦Îªµ×²ã±ä»Æ²»±äºÚ£¬ÎÞÆøÅÝ£¬Ð±ÃæÑÕÉ«±ä»Æ¡£

6.6 È·¶¨¼ø¶¨

³õ²½¼ø¶¨½á¹ûÏà·ûÕßÓÃ΢ÉúÎïÉú»¯¼ø¶¨ÏµÍ³»òÉÌÆ·»¯Éú»¯¼ø¶¨ÊÔ¼Á½øÐÐϵͳ¼ø¶¨¡£

6.7 ѪÇå¼ø¶¨·ÖÐÍ

6.7.1 ѪÇå¼ø¶¨

×ÔÓªÑøÇí֬бÃæÉÏÌôÈ¡´¿ÅàÑøÎïÓëO1Ⱥ¼°O139Ⱥ»ôÂÒ»¡¾úÕï¶ÏѪÇå×ö²£Æ¬Äý¼¯ÊÔÑé¡£²£Æ¬Äý¼¯ÓÃѪÇåµÄЧ¼ÛÒ»°ãӦΪ1£º40¡«1£º50¡£Èç¿ÉÒɾúÂäÔÚѪÇåÖкܿ죨һ°ãÔÚ10 sÄÚ£©³öÏÖÈâÑۿɼûµÄÃ÷ÏÔÄý¼¯£¬ÔÚÉúÀíÑÎË®Öв»Äý¼¯ÕßÅÐΪÑôÐÔ¡£¾ù²»Äý¼¯·½¿É±¨¸æδ¼ì³öO1Ⱥ¼°O139Ⱥ»ôÂÒ»¡¾ú¡£

6.7.2 O1Ⱥ»ôÂÒ»¡¾úѪÇå·ÖÐÍ

ÉÏÊöÈ·¶¨ÎªO1Ⱥ»ôÂÒ»¡¾úµÄÅàÑøÎ·Ö±ðʹÓÃС´¨Ðͼ°µ¾Ò¶Ð͵¥¼ÛѪÇå×ö²£Æ¬Äý¼¯£¬Í¬Ê±×öÉúÀíÑÎË®¶ÔÕÕ¡£

6.8 ±¨¸æ

µ±¼ì³öµÄ¿ÉÒɾúÂäÉú»¯Ñ§ÐÔ×´·ûºÏ±í1ÒªÇó£¬Í¬Ê±Óë»ôÂÒ»¡¾úÕï¶ÏѪÇåÄý¼¯£¨ÉúÀíÑÎË®²»Äý¼¯£©£¬±¨¸æ25g£¨mL£©ÑùÆ·Öмì³ö»ôÂÒ»¡¾ú¡£»ôÂÒ»¡¾úÖ÷ÒªÐÔ×´ÓëÆäËû»¡¾úµÄ¼ø±ð¼û±í2¡£

±í1»ôÂÒ»¡¾úµÄÉú»¯ÐÔ×´

ÊÔÑéÏîÄ¿

½á¹û

¸ïÀ¼ÊÏȾɫ¾µ¼ì

ÒõÐÔ£¬ÎÞÑ¿°û

Ñõ»¯Ã¸

£«

ճ˿ÊÔÑé

£«

¶¯Á¦

£«

ÕáÌÇ

£«

ÆÏÌÑÌÇ

£«

·Ö½âÆÏÌÑÌDzúÆø

£­

ÈéÌÇ

£­/£«

Áò»¯Çâ

£­

×¢£º£«ÑôÐÔ£»£­ÒõÐÔ

±í2 »ôÂÒ»¡¾úÖ÷ÒªÐÔ×´ÓëÆäËû»¡¾úµÄ¼ø±ð


Ãû³Æ

Ñõ

»¯

ø

˵

°±

Ëá

¾«

°±

Ëá

Äñ

°±

Ëá

Ã÷

½º

ëå

ø

V

þ1

P

42

¡æ

Éú

³¤

Õá

ÌÇ

D

þ1

ÏË

ά

¶þ

ÌÇ

ÈéÌÇ

°¢

À­

²®

ÌÇ

D

þ1

¸Ê

¶

ÌÇ

D

þ1

¸Ê

¶

´¼

O N P G

ÊÈÑÎÐÔÊÔÑéNaClº¬Á¿£¨£¥£©

0

3

6

8

1

0

¸±ÈÜѪÐÔ»¡¾ú

£«

£«

£­

£«

£«

V

£­

£«

£­

V

£­

£«

£«

£«

£­

£­

£«

£«

£«

£­

´´ÉË»¡¾ú

£«

£«

£­

£«

£«

£­

£­

£«

£­

£«

£«

£­

£«

V

£«

£­

£«

£«

£­

£­

ÈÜÔ廡¾ú

£«

£«

£­

£«

£«

£­

£«

£«

£«

£­

£­

£­

£«

£«

£­

£­

£«

£«

£«

£«

»ôÂÒ»¡¾ú

£«

£«

£­

£«

£«

£­

V

£«

£«

£­

£­

£­

£«

£«

£«

£«

£«

£­

£­

£­

Äâ̬»¡¾ú

£«

£«

£­

£«

£«

£­

£­

£«

£­

£­

£­

£­

£«

£«

£«

£«

£«

£­

£­

£­

ºÓ»¡¾ú

£«

£­

£«

£­

£«

£­

£­

V

£«

£«

£­

£«

£«

£«

£«

£­

£«

£«

V

£­

¸¥ÊÏ»¡¾ú

£«

£­

£«

£­

£«

£­

£­

£­

£«

£­

£­

£«

£«

£«

£«

£­

£«

£«

£«

£­

÷ÊÏ»¡¾ú

£­

£«

£«

£­

£«

£­

£«

V

£«

£­

£­

£­

£«

£«

£«

£­

£«

£«

V

£­

»ôÀû˹»¡¾ú

£«

£­

£­

£­

£­

£­

£­

nd

£­

£­

£­

£«

£«

£­

£­

£­

£«

£«

£­

£­

×¢£ºnd±íʾδÊÔÑ飻V±íʾ¿É±ä¡£

7. ¶¾Á¦»ùÒò¼ì²â

Èç¼ø¶¨½á¹ûΪ»ôÂÒ»¡¾ú£¬Ðè½øÐÐctxAB»ùÒòµÄ¼ì²â¡£×¢Ò⣺Ҳ¿É²ÉÓþ­¹ýÑéÖ¤µÄÉÌÆ·»¯ÊÔ¼ÁºÐ¡£

7.1 DNAÄ£°åµÄÖƱ¸

È¡ÊÊÁ¿´¿ÅàÑø¾úÂä¼ÓÈë500¦ÌLÃð¾údH2OÖлìÔÈ£¬Öó·Ð10min£¬15000¡ÁgÀëÐÄ3 min¡£È¡ÉÏÇåÒº´¢´æÔÚ-20¡æÖ±ÖÁʹÓá£Ò²¿ÉÒÔÓÃÉÌÒµ»¯µÄDNAÌáÈ¡ÊÔ¼ÁºÐ£¬°´Æä˵Ã÷ÌáÈ¡ÖƱ¸DNAÄ£°å¡£

7.2 PCRÀ©Ôö

7.2.1 ÒýÎï

¿ÉʹÓÃÒýÎï¶Ô5'-ATT TTG AGG TGT TCC ATG TG-3'ºÍ5'-ATA AAGCAGTCA GGT GGT CT-3'¡£À©Ôö²úÎïÈ«³¤749bp¡£

7.2.2 Òõ¡¢ÑôÐÔ¶ÔÕÕÉèÖÃ

ÒõÐÔ¶ÔÕÕ(¿Õ°×¶ÔÕÕ)ÒÔÃð¾úË®×÷ΪPCR·´Ó¦µÄÄ£°å£»

ÑôÐÔ¶ÔÕÕ²ÉÓú¬Óмì²âÐòÁеÄDNA£¨»òÖÊÁ££©×÷ΪPCR·´Ó¦µÄÄ£°å¡£

7.2.3PCRÀ©Ôö·´Ó¦Ìåϵ


ÊÔ¼Á

·´Ó¦Ìå»ý

dH2O

12.8 ¦ÌL

10¡Á Buffer. MgCl2

2.0 ¦ÌL

dNTPs

0.8 ¦ÌL

»ìºÏÒýÎï

2.0 ¦ÌL

Ä£°å

2.0 ¦ÌL

Taqø

0.4 ¦ÌL

×ÜÌå»ý

i. ¦Ì

L


7.2.4 PCR·´Ó¦³ÌÐò


Ô¤±äÐÔ

94¡æ

5 min£»

±äÐÔ

94¡æ

30 sec£¬

ÍË»ð

56¡æ

40 sec£¬

ÑÓÉì

72¡æ

2 min£¬30¸öÑ­»·£»

ÖÕÑÓÉì

72¡æ

7 min£»

±£´æ

8¡æ

¡ª¡ª


7.2.5 µçÓ¾

ÓÃ0.5.5cÐòÖƱ¸1.5£¥µÄÇíÖ¬ÌÇÄý½º£¨º¬EB»òGoldview 0.5¦Ìg /mL£©¡£È¡5¦ÌL²úÎïµãÑù£¨¿É°üÀ¨ÊÊÁ¿ÉÏÑù»º³åÒº£©£¬ÓÃDNA·Ö×ÓÁ¿±ê¼ÇÎï×ö²ÎÕÕ£¬µçѹ100 V£¬µçÓ¾50 min£¨¸ù¾ÝʵÑéÊÒÒÇÆ÷Çé¿öÈ·¶¨¾ßÌåµçÓ¾Ìõ¼þ£©¡£Ê¹ÓÃÄý½º³ÉÏñϵͳ¶ÔµçÓ¾½á¹û½øÐб£´æºÍ·ÖÎö¡£

7.3 ½á¹ûÅж¨

ÒõÐÔ¶ÔÕÕδ³öÏÖÌõ´ø£¬ÑôÐÔ¶ÔÕÕ³öÏÖÔ¤ÆÚ´óСµÄÀ©ÔöÌõ´øÌõ¼þÏ£¬Èç´ý²âÑùÆ·³öÏÖ749 bp´óСµÄÀ©ÔöÌõ´ø£¬Ôò¿ÉÅж¨¸Ã¾úÖêЯ´øctxAB»ùÒò£»Î´³öÏÖ749bp´óСµÄÀ©ÔöÌõ´ø£¬Ôò¿ÉÅж¨²»Ð¯´øctxAB»ùÒò¡£

Èç¹ûÒõÐÔ¶ÔÕÕ³öÏÖÌõ´øºÍ/»òÑôÐÔ¶ÔÕÕδ³öÏÖÔ¤ÆÚ´óСµÄÀ©ÔöÌõ´ø£¬±¾´Î´ý²âÑùÆ·µÄ½á¹ûÎÞЧ£¬Ó¦ÖØнøÐÐÊÔÑ飬²¢ÅųýÎÛȾÒòËØ¡£


ÉÏһƪ£ºÍäÇú¾ú¼ìÑé±ê×¼²Ù×÷³ÌÐò

ÏÂһƪ£º´´ÉË»¡¾ú¼ìÑé·½·¨GB4789.44-2020

Ïà¹ØÎÄÕÂ:
»ôÂÒ¡¢¸±ÈÜѪÐÔ»¡¾úÔö¾úÒº »ôÂÒ»¡¾ú¼ìÑé·½·¨¼°½á¹ûÅжÏ
»ôÂÒ»¡¾ú »ôÂÒË«ÌÇÌúÇí֬ʵÑéÔ­Àí¼°ÏÖÏó
»ôÂÒ»¡¾úµÄÉúÎïѧÌØÐÔ »ôÂÒ»¡¾ú¡ª¡ª¿ìËÙ¸¨ÖúÕï¶Ï
»ôÂÒ»¡¾ú¡ª¡ªÁ÷Ðв¡Ñ§·ÖÐͼ¼Êõ »ôÂÒµÄʵÑéÕï¶Ï¼°·ÀÖÎÔ­Ôò
»ôÂÒ»¡¾úµÄÌØÕ÷ »ôÂÒ»¡¾úµÄÐÔ×´
Ê×Ò³| ¹ØÓÚÎÒÃÇ| ÍøÉÏÉ̳Ç| ÔÚÏß¿Í·þ| ÁªÏµÎÒÃÇ
ÒµÎñÁªÏµµç»°
400-0532-596 0532-66087773
0532-66087762 0532-81935169
ÓÊÏ䣺qdhbywg@vip.126.com
µØÖ·£ºÇൺÊгÇÑôÇø½õ»ã·1ºÅA2¶°
²úÆ·¼¼Êõ×Éѯ
¹¤×÷ÈÕ(ÖÜÒ»ÖÁÖÜÁù8:00-18:00)£º
18562658263 13176865511
ÆäËüʱ¶Î£º13105190021
ͶËßÓ뽨Ò飺13105190021 13006536294