试剂盒组成:
组成
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别名
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规格
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配制依据
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溶液A
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结晶紫染色液
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5ml*2
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将1.0g结晶紫完全溶解于20ml 95%乙醇,
然后与80ml 1%草酸铵水解液混合。
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溶液B
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碘液
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5ml*2
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将1.0g碘与2.0g碘化钾混合,然后加少许
蒸馏水充分振摇,待完全溶解,再加蒸馏水至300ml。
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溶液C
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95%乙醇
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5ml*2
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/
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溶液D
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沙黄复染液
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5ml*2
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将0.25g沙黄溶解于10ml95%乙醇中,然后
加90ml蒸馏水稀释。
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检验原理:
通过结晶紫初染和碘液媒染后,在细胞壁内形成了不溶于水的结晶紫与碘的复合物,革兰氏阳性菌由于其细胞壁较厚、肽聚糖网层次较多且交联致密,故遇乙醇或丙酮脱色处理时,因失水反而使网孔缩小,再加上它不含类脂,故乙醇处理不会出现缝隙,因此,能把结晶紫与碘复合物牢牢留在壁内,使其仍呈紫色;而革兰氏阴性菌因其细胞壁薄、外膜层类脂含量高、肽聚糖层薄且交联度差,在遇脱色剂后,以类脂为主的外膜迅速溶解,薄而松散的肽聚糖网不能阻挡结晶紫与碘复合物的溶出,因此通过乙醇脱色后仍呈无色,再经沙黄等红色染料复染,就使革兰氏阴性菌呈红色。
用法:
1.涂片经火焰固定,加(结晶紫溶液)溶液A染1分钟,用清水冲去染液。
2.加(碘液)溶液B染1分钟,水洗。
3.加(95%乙醇)溶液C,不时摇动玻片约10-30秒,至无紫色脱落为止,水洗。
4.加(沙黄复染液)溶液D,染1分钟,水洗。
5.干后油镜镜检。阳性菌呈紫色、阴性菌呈淡红色。
革兰氏染色液质控结果:
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大肠埃希氏菌O157:H7 ATCC35150
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金黄色葡萄球菌ATCC25923
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革兰氏染色液试剂盒微生物灵敏度试验:
按标签用法制备培养基,接种以下质控菌株,放置/℃/培养/小时。
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